摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-13页 |
文献综述 | 第13-20页 |
第一章 鸡传染性支气管炎研究进展 | 第13-20页 |
·病原研究 | 第13-14页 |
·病原形态学特征 | 第13-14页 |
·病毒的培养增殖 | 第14页 |
·IBV 诊断方法 | 第14-16页 |
·病原的分离鉴定 | 第14-15页 |
·血清学诊断方法 | 第15页 |
·分子生物学诊断方法 | 第15-16页 |
·分子生物学研究进展 | 第16-19页 |
·IBV 基因组 | 第16页 |
·IBV 主要结构蛋白及功能 | 第16-19页 |
·展望 | 第19-20页 |
试验研究 | 第20-61页 |
第二章 鸡传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离鉴定 | 第20-25页 |
·材料 | 第20页 |
·病料 | 第20页 |
·鸡胚及雏鸡 | 第20页 |
·试剂 | 第20页 |
·仪器 | 第20-21页 |
·方法 | 第21页 |
·流行病学调查 | 第21页 |
·病料处理 | 第21页 |
·鸡胚接种与传代 | 第21页 |
·病毒的鉴定 | 第21页 |
·结果 | 第21-23页 |
·流行病学调查 | 第21-22页 |
·病毒的鉴定 | 第22-23页 |
·讨论 | 第23-24页 |
·小结 | 第24-25页 |
第三章 鸡传染性支气管炎病毒SX-H09 株、SX-W09 株M 基因的克隆及分子遗传变异分析 | 第25-38页 |
·材料 | 第25-26页 |
·毒株 | 第25页 |
·鸡胚 | 第25页 |
·载体与菌株 | 第25页 |
·主要试剂 | 第25页 |
·引物 | 第25-26页 |
·IBV M 基因参考毒株名称及GenBank 登录号 | 第26页 |
·培养基的配制及常用溶液的配制 | 第26页 |
·主要仪器 | 第26页 |
·方法 | 第26-30页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株病毒增殖与RNA 的提取 | 第26-27页 |
·RT-PCR | 第27页 |
·PCR 产物的纯化与回收 | 第27-28页 |
·PCR 产物的连接与转化 | 第28-29页 |
·重组质粒pMD18-T-M(SX-H09)、pMD18-T-M(SX-W09)的提取 | 第29页 |
·重组质粒pMD18-T-M(SX-H09)、pMD18-T-M(SX-W09)酶切鉴定 | 第29-30页 |
·阳性质粒的序列测定 | 第30页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株M 蛋白一级、二级结构和抗原表位的预测分析 | 第30页 |
·结果 | 第30-36页 |
·SX-H09 株、SX-W09 株M 基因的RT-PCR 扩增 | 第30-31页 |
·重组质粒pMD18-T-M(SX-H09)、pMD18-T-M(SX-W09)酶切鉴定 | 第31页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株M 基因的核苷酸序列测定 | 第31-32页 |
·IBV 不同毒株M 基因的核苷酸和氨基酸相似性分析 | 第32页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株与参考株M 基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较 | 第32-33页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株M 基因进化分析 | 第33页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株M 蛋白一级、二级结构预测 | 第33-34页 |
·IBV SX-H09 株、SX-W09 株M 蛋白抗原表位预测 | 第34-36页 |
·讨论 | 第36页 |
·小结 | 第36-38页 |
第四章 鸡传染性支气管炎病毒SX-W09 株N 基因的克隆 | 第38-48页 |
·材料 | 第38-39页 |
·毒株 | 第38页 |
·鸡胚 | 第38页 |
·载体与菌株 | 第38页 |
·主要试剂 | 第38页 |
·引物 | 第38-39页 |
·IBV N 基因参考毒株名称及GenBank 登录号 | 第39页 |
·培养基的配制及常用溶液的配制 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39页 |
·方法 | 第39-41页 |
·IBV SX-W09 株病毒增殖与RNA 的提取 | 第39页 |
·N 基因cDNA 链的合成 | 第39-40页 |
·PCR 扩增 | 第40页 |
·PCR 产物的回收纯化 | 第40页 |
·PCR 产物的连接与转化 | 第40页 |
·重组质粒pMD18-T-N 的提取 | 第40页 |
·重组质粒pMD18-T-N 酶切鉴定 | 第40页 |
·阳性质粒的序列测定 | 第40-41页 |
·SX-W09 株N 蛋白一级、二级结构和抗原表位的预测分析 | 第41页 |
·结果 | 第41-46页 |
·SX-W09 株N 基因的扩增 | 第41页 |
·pMD18-T-N 重组质粒酶切鉴定 | 第41-42页 |
·IBV SX-W09 株N 基因的核苷酸序列测定 | 第42页 |
·IBV 不同毒株N 基因的核苷酸和氨基酸相似性分析 | 第42-43页 |
·IBV SX-W09 株与参考株N 基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较 | 第43页 |
·IBV SX-W09 株N 基因进化分析 | 第43页 |
·IBV SX-W09 株N 蛋白一级、二级结构预测 | 第43-44页 |
·IBV SX-W09 株N 蛋白抗原表位预测 | 第44-46页 |
·讨论 | 第46-47页 |
·小结 | 第47-48页 |
第五章 鸡传染性支气管炎病毒SX-W09 株N 基因在大肠杆菌中的表达及产物免疫活性检测 | 第48-61页 |
·材料 | 第48-50页 |
·菌株、质粒及实验动物 | 第48页 |
·引物设计与合成 | 第48页 |
·主要试剂 | 第48-49页 |
·常用溶液的配制 | 第49-50页 |
·实验仪器 | 第50页 |
·方法 | 第50-55页 |
·IBV SX-W09 株N 基因原核表达载体的构建 | 第50-52页 |
·重组质粒pET32a-T-N 在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第52-53页 |
·纯化重组蛋白制备抗原 | 第53-54页 |
·核蛋白多克隆抗体的制备 | 第54页 |
·间接ELISA 检测抗血清的效价 | 第54-55页 |
·Western Blot 检测N 蛋白的特异性 | 第55页 |
·结果 | 第55-59页 |
·重组质粒的构建及鉴定 | 第55页 |
·重组核蛋白基因的表达和鉴定 | 第55-58页 |
·抗血清ELISA 检测结果 | 第58页 |
·Western Blot 特异性检测 | 第58-59页 |
·讨论 | 第59-60页 |
·小结 | 第60-61页 |
结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-69页 |
缩略词 | 第69-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
作者简介 | 第71页 |