| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 生物催化及手性药物 | 第17-18页 |
| 1.1.1 生物催化 | 第17页 |
| 1.1.2 手性药物 | 第17页 |
| 1.1.3 生物催化生产手性醇 | 第17-18页 |
| 1.2 手性药物中间体及研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 阿瑞匹坦及中间体 | 第18-19页 |
| 1.2.2 阿瑞匹坦中间体研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.3 依折麦布及中间体 | 第20-21页 |
| 1.2.4 依折麦布中间体研究进展 | 第21页 |
| 1.3 羰基还原酶 | 第21-23页 |
| 1.3.1 羰基还原酶 | 第21-22页 |
| 1.3.2 短链脱氢酶 | 第22页 |
| 1.3.3 短链脱氢酶的对映体选择性 | 第22-23页 |
| 1.4 课题研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 不对称还原BTA的羰基还原酶的基因挖掘 | 第25-39页 |
| 2.1 本章主要研究内容 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验溶液配置 | 第25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.4.1 K. pastoris GS115和B.cenocepacia菌株的活性检测 | 第25-26页 |
| 2.4.2 基于NCBI数据库的Blast序列比对 | 第26-27页 |
| 2.4.3 构建E coli基因工程菌 | 第27-31页 |
| 2.4.4 蛋白表达及活性检测 | 第31页 |
| 2.5 实验结果与讨论 | 第31-36页 |
| 2.5.1 K.pastoris GS115和B.cenocepacia菌株的活性检测 | 第31-32页 |
| 2.5.2 构建E coli基因工程菌 | 第32-34页 |
| 2.5.3 蛋白表达及活性检测 | 第34-36页 |
| 2.5.4 Bc-3 | 第36页 |
| 2.6 本章小结 | 第36-39页 |
| 第三章 Bc-3的蛋白纯化 | 第39-45页 |
| 3.1 本章主要研究内容 | 第39页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第39页 |
| 3.3 实验溶液配置 | 第39页 |
| 3.4 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.4.1 构建Bc-3-pET-22b(+)-His基因工程菌 | 第39-40页 |
| 3.4.2 Bc-3的表达与纯化 | 第40-41页 |
| 3.4.3 活性检测 | 第41页 |
| 3.4.4 更换表达载体,纯化蛋白 | 第41页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第41-44页 |
| 3.5.1 构建Bc-3-pET-22b(+)-His基因工程菌 | 第41页 |
| 3.5.2 Bc-3的表达与纯化 | 第41-42页 |
| 3.5.3 活性检测 | 第42-44页 |
| 3.5.4 更换表达载体,纯化蛋白 | 第44页 |
| 3.6 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 全细胞催化不对称还原BTA的条件优化 | 第45-55页 |
| 4.1 本章主要研究内容 | 第45页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第45页 |
| 4.3 实验溶液配置 | 第45页 |
| 4.4 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.4.1 Bc-3基因工程菌诱导条件的优化 | 第46页 |
| 4.4.2 反应条件的优化 | 第46-47页 |
| 4.4.3 底物特异性 | 第47-48页 |
| 4.5 实验结果与讨论 | 第48-54页 |
| 4.5.1 Bc-3基因工程菌诱导条件的优化 | 第48-49页 |
| 4.5.2 反应条件的优化 | 第49-53页 |
| 4.5.3 底物特异性 | 第53-54页 |
| 4.6 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 FOP-酮的不对称还原 | 第55-67页 |
| 5.1 本章主要研究内容 | 第55页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第55页 |
| 5.3 实验溶液配置 | 第55页 |
| 5.4 实验方法 | 第55-60页 |
| 5.4.1 不对称还原FOP-酮的菌株筛选 | 第55-56页 |
| 5.4.2 构建重组质粒 | 第56-58页 |
| 5.4.3 构建K. pastoris GS115基因工程菌 | 第58-59页 |
| 5.4.4 诱导表达蛋白 | 第59-60页 |
| 5.5 实验结果与讨论 | 第60-65页 |
| 5.5.1 不对称还原FOP-酮的菌株筛选 | 第60-62页 |
| 5.5.2 构建重组质粒 | 第62-63页 |
| 5.5.3 构建K.pastoris GS115基因工程菌 | 第63-65页 |
| 5.5.4 诱导表达蛋白 | 第65页 |
| 5.6 本章小结 | 第65-67页 |
| 第六章 Bc-3的定点突变 | 第67-77页 |
| 6.1 本章主要研究内容 | 第67页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第67页 |
| 6.3 实验溶液配置 | 第67页 |
| 6.4 实验方法 | 第67-70页 |
| 6.4.1 引物设计 | 第67-68页 |
| 6.4.2 构建突变基因工程菌 | 第68-70页 |
| 6.4.3 蛋白表达及活性检测 | 第70页 |
| 6.5 实验结果与讨论 | 第70-75页 |
| 6.5.1 构建突变基因工程菌 | 第70-72页 |
| 6.5.2 蛋白表达及活性检测 | 第72-75页 |
| 6.6 本章小结 | 第75-77页 |
| 第七章 总结 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 附录 | 第83-91页 |
| 作者与导师简介 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第95-96页 |
| 附件 | 第96-97页 |
