| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 PSⅡ的结构和功能 | 第12-13页 |
| 1.2 D1蛋白 | 第13-15页 |
| 1.3 C末端尾巴的研究现状及存在的问题 | 第15-17页 |
| 1.4 叶绿体转化技术 | 第17-19页 |
| 1.4.1 叶绿体转化的原理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 叶绿体转化的方法 | 第18页 |
| 1.4.3 叶绿体转化的过程 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的主要内容和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 烟草叶绿体转化载体的构建 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒及菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 烟草的种植 | 第22页 |
| 2.2.2 植物基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 DNA片段的回收 | 第23-24页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.5 DH5a感受态细胞制备 | 第24-25页 |
| 2.2.6 DH5a感受态细胞的转化 | 第25页 |
| 2.2.7 载体构建的一般方法 | 第25-28页 |
| 2.2.8 同源片段的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.9 同源片段的点突变 | 第29页 |
| 2.2.10 四种同源片段组合载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.11 表达框的嵌入 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-45页 |
| 2.3.1 烟草叶绿体转化载体的设计策略 | 第31-33页 |
| 2.3.2 同源片段的克隆及验证 | 第33-35页 |
| 2.3.3 点突变同源片段的克隆及验证 | 第35页 |
| 2.3.4 四种同源片段组合载体的构建及验证 | 第35-39页 |
| 2.3.5 外源基因表达框的构建及验证 | 第39-42页 |
| 2.3.6 叶绿体转化载体的构建及验证 | 第42-43页 |
| 2.3.7 载体图谱 | 第43-45页 |
| 第三章 烟草叶绿体转化及转基因植株的获得 | 第45-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第45页 |
| 3.1.2 质粒及菌株 | 第45页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第45页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-52页 |
| 3.2.1 基因枪法进行叶绿体转化的原理 | 第45-46页 |
| 3.2.2 质粒DNA的大量提取 | 第46-47页 |
| 3.2.3 质粒DNA的纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.4 受体材料的获得及预处理 | 第48页 |
| 3.2.5 金粉处理及微弹的制备 | 第48-49页 |
| 3.2.6 基因枪轰击 | 第49-50页 |
| 3.2.7 轰击后叶片的过渡培养 | 第50页 |
| 3.2.8 转基因植株的筛选及同质化水平的提高 | 第50页 |
| 3.2.9 转基因植株PCR鉴定的引物设计 | 第50-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-58页 |
| 3.3.1 质粒DNA的大提及检测 | 第52-54页 |
| 3.3.3 筛选植株统计 | 第54-56页 |
| 3.3.4 转基因植株PCR鉴定 | 第56-58页 |
| 第四章 拟南芥转基因载体的构建及瞬时表达 | 第58-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第58-59页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第58页 |
| 4.1.2 质粒及菌株 | 第58-59页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-64页 |
| 4.2.1 叶绿体转运肽编码序列的扩增 | 第59-62页 |
| 4.2.2 目的片段的制备 | 第62页 |
| 4.2.3 烟草瞬时表达载体的设计 | 第62-63页 |
| 4.2.4 烟草瞬时表达的过程 | 第63-64页 |
| 4.4 结果与分析 | 第64-69页 |
| 4.4.1 拟南芥转基因载体构建及验证 | 第64-65页 |
| 4.4.2 瞬时表达载体的构建及验证 | 第65-67页 |
| 4.4.3 瞬时表达结果及分析 | 第67-69页 |
| 第五章 拟南芥转基因植株的获得及分析 | 第69-83页 |
| 5.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 5.1.2 质粒及菌株 | 第69页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第69-70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-75页 |
| 5.2.1 拟南芥的种植 | 第70页 |
| 5.2.2 拟南芥突变体鉴定 | 第70-71页 |
| 5.2.3 农杆菌的侵染 | 第71-72页 |
| 5.2.4 拟南芥DNA的提取 | 第72-73页 |
| 5.2.5 植物总蛋白的提取及鉴定 | 第73-74页 |
| 5.2.6 RNA的提取 | 第74页 |
| 5.2.7 cDNA的制备及定量检测 | 第74-75页 |
| 5.3 结果与分析 | 第75-83页 |
| 5.3.1 突变体植株背景的鉴定 | 第75-78页 |
| 5.3.2 农杆菌侵染 | 第78页 |
| 5.3.3 DNA水平鉴定转基因植株 | 第78页 |
| 5.3.4 转基因拟南芥的Western blot | 第78-79页 |
| 5.3.5 atctpa-1转基因植株的筛选 | 第79-80页 |
| 5.3.6 atctpa-1转基因植株的RT-PCR检测 | 第80-81页 |
| 5.3.7 atctpa-1转基因植株的Western blot检测 | 第81页 |
| 5.3.8 小结 | 第81-83页 |
| 第六章 D1蛋白C末端尾巴对CtpA酶剪切效率的影响 | 第83-92页 |
| 6.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 6.1.1 质粒及菌株 | 第83页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第83-84页 |
| 6.2 实验方法 | 第84-87页 |
| 6.2.1 体外表达载体构建 | 第84-85页 |
| 6.2.2 GST融合蛋白的获得 | 第85-87页 |
| 6.2.3 CtpA蛋白酶活性检测 | 第87页 |
| 6.3 结果与分析 | 第87-92页 |
| 6.3.1 体外表达载体的构建 | 第87-89页 |
| 6.3.3 D1的C末端尾巴对CtpA酶剪切效率的影响 | 第89-92页 |
| 全文讨论及结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录Ⅰ 英文缩写 | 第100-102页 |
| 附录Ⅱ 溶液配方 | 第102-105页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
