提要 | 第1-11页 |
前言 | 第11-13页 |
第一篇 文献综述 | 第13-26页 |
综述一 Α1, 3-岩藻糖基转移酶VII 及其产物SIALYL LEWIS X | 第13-21页 |
一、FUT7 染色体定位和表达 | 第14页 |
二、FUT7 结构及生物学特性 | 第14-15页 |
三、sLe~x 的生物合成 | 第15-16页 |
四、sLe~x 的生物学功能 | 第16-20页 |
五、展望 | 第20-21页 |
综述二 选择素及其在胚胎着床过程中的作用 | 第21-26页 |
一、选择素家族概况 | 第21-22页 |
二、选择素的天然配体及其结构特点 | 第22-23页 |
三、选择素及配体在哺乳动物胚胎着床过程中的作用 | 第23-25页 |
四、展望 | 第25-26页 |
第二篇 实验研究 | 第26-98页 |
第一章人Α1, 3-岩藻糖基转移酶VII 荧光真核表达体系的建立和鉴定 | 第26-54页 |
第一节 材料和方法 | 第26-42页 |
一、材料和仪器 | 第26-28页 |
1. 质粒、菌株和细胞株 | 第26-27页 |
2. 主要试剂 | 第27页 |
3. 主要仪器 | 第27-28页 |
二、pMD18-T-FUT7 质粒的构建 | 第28-35页 |
1. 编码人FUT7 全长cDNA 的获得 | 第28-31页 |
2. pMD18-T-FUT7 质粒的构建 | 第31-32页 |
3. pMD18-T-FUT7 质粒的转化 | 第32页 |
4. 重组质粒的筛选 | 第32-34页 |
5. 重组质粒的大量制备 | 第34-35页 |
三、表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的构建 | 第35-38页 |
1. FUT7 与pIRE52-EGFP 载体片段的获得 | 第35-36页 |
2. FUT7 与pIRE52-EGFP 载体的连接 | 第36页 |
3. 重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
4. 表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的测序鉴定 | 第37-38页 |
四、FUT7 在RL95-2 细胞中的瞬时表达及鉴定 | 第38-42页 |
1. 细胞培养 | 第38页 |
2. 细胞转染 | 第38-40页 |
3. 转染细胞的收获 | 第40-41页 |
4. 绿色荧光蛋白表达的观察 | 第41页 |
5. 目的基因的RT-PCR 鉴定 | 第41-42页 |
6. 统计分析 | 第42页 |
第二节 实验结果和分析 | 第42-47页 |
一、pMD18-T-FUT7 质粒的构建 | 第42-44页 |
1. PCR 产物的扩增 | 第42-43页 |
2. PCR 产物测序结果 | 第43页 |
3. pMD18-T-FUT7 质粒酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
二、表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的构建 | 第44-45页 |
1. 酶切鉴定 | 第44-45页 |
2. 表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的测序结果 | 第45页 |
三、FUT7 在RL95-2 细胞中的表达 | 第45-47页 |
第三节 讨论 | 第47-54页 |
第二章 胚胎体外着床模型(RL95-2 与JAR)双向识别特性的研究 | 第54-75页 |
第一节 材料和方法 | 第54-62页 |
一、 实验材料 | 第54-55页 |
1. 实验细胞 | 第54-55页 |
2. 主要试剂 | 第55页 |
3. 主要仪器 | 第55页 |
二、 实验方法 | 第55-62页 |
1. RL95-2 和JAR 着床模型的培养 | 第55-56页 |
2. RL95-2 和JAR 系统的黏附检测 | 第56页 |
3. RL95-2 黏附识别特性的检测 | 第56-59页 |
4. JAR 黏附识别特性的检测 | 第59-62页 |
5. 统计分析 | 第62页 |
第二节 实验结果及分析 | 第62-71页 |
1. RL95-2 和JAR 系统的黏附检测 | 第62页 |
2. RL95-2 黏附识别特性的检测 | 第62-67页 |
3. JAR 黏附识别特性的检测 | 第67-71页 |
第三节 讨论 | 第71-75页 |
第三章 FUT7 在子宫内膜中过表达对胚胎植入影响的实验研究 | 第75-88页 |
第一节 材料和方法 | 第75-81页 |
一、实验材料 | 第75-77页 |
1. 实验细胞 | 第75页 |
2. 动物准备 | 第75-76页 |
3. 主要试剂 | 第76页 |
4. 主要仪器 | 第76-77页 |
二、 实验方法 | 第77-80页 |
1. 体外实验中子宫内膜FUT7 过表达对胚胎黏附的影响 | 第77-80页 |
2. 在体实验子宫内膜中FUT7 过表达对胚胎着床影响 | 第80页 |
三、统计分析 | 第80-81页 |
第二节 实验结果及分析 | 第81-86页 |
1、体外实验中子宫内膜FUT7 过表达对胚胎着床的影响 | 第81-85页 |
2、在体实验中FUT7 过表达对胚胎着床影响 | 第85-86页 |
第三节 讨论 | 第86-88页 |
第四章 胚胎模型内FUT7 过表达对胚胎植入影响的实验研究 | 第88-97页 |
第一节 材料和方法 | 第88-92页 |
一、实验材料 | 第88-89页 |
1. 实验细胞 | 第88页 |
2. 主要试剂 | 第88-89页 |
3. 主要仪器 | 第89页 |
二、 实验方法 | 第89-92页 |
1. JAR 细胞中FUT7 的转染及RT-PCR 检测 | 第89-90页 |
2. FUT7 表达的流式检测 | 第90-91页 |
3. sLe~x 表达的流式检测 | 第91页 |
4. JAR 细胞中FUT7 过表达对黏附的影响 | 第91-92页 |
5. 统计分析 | 第92页 |
第二节 实验结果及分析 | 第92-94页 |
1. RT-PCR 检测 | 第92页 |
2. FUT7 表达的流式检测 | 第92-93页 |
3. sLe~x 表达的流式检测 | 第93-94页 |
4. JAR 细胞中FUT7 过表达对黏附的影响 | 第94页 |
第三节 讨论 | 第94-97页 |
第五章 结论 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-112页 |
攻读博士期间发表的学术论文 | 第112-113页 |
致谢 | 第113-114页 |
摘要 | 第114-120页 |
Abstract | 第120-128页 |