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重组人岩藻糖基转移酶Ⅶ过表达对胚胎植入影响的实验研究

提要第1-11页
前言第11-13页
第一篇 文献综述第13-26页
 综述一 Α1, 3-岩藻糖基转移酶VII 及其产物SIALYL LEWIS X第13-21页
  一、FUT7 染色体定位和表达第14页
  二、FUT7 结构及生物学特性第14-15页
  三、sLe~x 的生物合成第15-16页
  四、sLe~x 的生物学功能第16-20页
  五、展望第20-21页
 综述二 选择素及其在胚胎着床过程中的作用第21-26页
  一、选择素家族概况第21-22页
  二、选择素的天然配体及其结构特点第22-23页
  三、选择素及配体在哺乳动物胚胎着床过程中的作用第23-25页
  四、展望第25-26页
第二篇 实验研究第26-98页
 第一章人Α1, 3-岩藻糖基转移酶VII 荧光真核表达体系的建立和鉴定第26-54页
  第一节 材料和方法第26-42页
   一、材料和仪器第26-28页
    1. 质粒、菌株和细胞株第26-27页
    2. 主要试剂第27页
    3. 主要仪器第27-28页
   二、pMD18-T-FUT7 质粒的构建第28-35页
    1. 编码人FUT7 全长cDNA 的获得第28-31页
    2. pMD18-T-FUT7 质粒的构建第31-32页
    3. pMD18-T-FUT7 质粒的转化第32页
    4. 重组质粒的筛选第32-34页
    5. 重组质粒的大量制备第34-35页
   三、表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的构建第35-38页
    1. FUT7 与pIRE52-EGFP 载体片段的获得第35-36页
    2. FUT7 与pIRE52-EGFP 载体的连接第36页
    3. 重组质粒的酶切鉴定第36-37页
    4. 表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的测序鉴定第37-38页
   四、FUT7 在RL95-2 细胞中的瞬时表达及鉴定第38-42页
    1. 细胞培养第38页
    2. 细胞转染第38-40页
    3. 转染细胞的收获第40-41页
    4. 绿色荧光蛋白表达的观察第41页
    5. 目的基因的RT-PCR 鉴定第41-42页
    6. 统计分析第42页
  第二节 实验结果和分析第42-47页
   一、pMD18-T-FUT7 质粒的构建第42-44页
    1. PCR 产物的扩增第42-43页
    2. PCR 产物测序结果第43页
    3. pMD18-T-FUT7 质粒酶切鉴定结果第43-44页
   二、表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的构建第44-45页
    1. 酶切鉴定第44-45页
    2. 表达质粒pIRE52-EGFP-FUT7 的测序结果第45页
   三、FUT7 在RL95-2 细胞中的表达第45-47页
  第三节 讨论第47-54页
 第二章 胚胎体外着床模型(RL95-2 与JAR)双向识别特性的研究第54-75页
  第一节 材料和方法第54-62页
   一、 实验材料第54-55页
    1. 实验细胞第54-55页
    2. 主要试剂第55页
    3. 主要仪器第55页
   二、 实验方法第55-62页
    1. RL95-2 和JAR 着床模型的培养第55-56页
    2. RL95-2 和JAR 系统的黏附检测第56页
    3. RL95-2 黏附识别特性的检测第56-59页
    4. JAR 黏附识别特性的检测第59-62页
    5. 统计分析第62页
  第二节 实验结果及分析第62-71页
   1. RL95-2 和JAR 系统的黏附检测第62页
   2. RL95-2 黏附识别特性的检测第62-67页
   3. JAR 黏附识别特性的检测第67-71页
  第三节 讨论第71-75页
 第三章 FUT7 在子宫内膜中过表达对胚胎植入影响的实验研究第75-88页
  第一节 材料和方法第75-81页
   一、实验材料第75-77页
    1. 实验细胞第75页
    2. 动物准备第75-76页
    3. 主要试剂第76页
    4. 主要仪器第76-77页
   二、 实验方法第77-80页
    1. 体外实验中子宫内膜FUT7 过表达对胚胎黏附的影响第77-80页
    2. 在体实验子宫内膜中FUT7 过表达对胚胎着床影响第80页
   三、统计分析第80-81页
  第二节 实验结果及分析第81-86页
   1、体外实验中子宫内膜FUT7 过表达对胚胎着床的影响第81-85页
   2、在体实验中FUT7 过表达对胚胎着床影响第85-86页
  第三节 讨论第86-88页
 第四章 胚胎模型内FUT7 过表达对胚胎植入影响的实验研究第88-97页
  第一节 材料和方法第88-92页
   一、实验材料第88-89页
    1. 实验细胞第88页
    2. 主要试剂第88-89页
    3. 主要仪器第89页
   二、 实验方法第89-92页
    1. JAR 细胞中FUT7 的转染及RT-PCR 检测第89-90页
    2. FUT7 表达的流式检测第90-91页
    3. sLe~x 表达的流式检测第91页
    4. JAR 细胞中FUT7 过表达对黏附的影响第91-92页
    5. 统计分析第92页
  第二节 实验结果及分析第92-94页
   1. RT-PCR 检测第92页
   2. FUT7 表达的流式检测第92-93页
   3. sLe~x 表达的流式检测第93-94页
   4. JAR 细胞中FUT7 过表达对黏附的影响第94页
  第三节 讨论第94-97页
 第五章 结论第97-98页
参考文献第98-112页
攻读博士期间发表的学术论文第112-113页
致谢第113-114页
摘要第114-120页
Abstract第120-128页

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