摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-11页 |
1 文献综述 | 第11-28页 |
·转基因水稻的研究 | 第11-15页 |
·基因转化的方法 | 第11-13页 |
·转基因技术的应用 | 第13-15页 |
·基因功能研究方法 | 第15-24页 |
·利用同源序列分析研究基因功能 | 第15页 |
·利用反向遗传学手段进行基因功能分析 | 第15-24页 |
·RACK1 蛋白 | 第24-25页 |
·本研究目的及意义 | 第25-28页 |
2 材料与方法 | 第28-36页 |
·材料 | 第28-29页 |
·植物材料 | 第28页 |
·菌种及载体 | 第28页 |
·酶及试剂(盒) | 第28页 |
·引物 | 第28-29页 |
·方法 | 第29-36页 |
·水稻OSRACK1 全长CDNA 的获得 | 第29-31页 |
·表达载体的构建 | 第31-34页 |
·过表达OsRACK1 表达载体构建 | 第31-32页 |
·反义OsRACK1表达载体的构建 | 第32页 |
·RNAiOsRACK1表达载体的构建 | 第32-34页 |
·农杆菌介导的水稻的遗传转化 | 第34-35页 |
·转基因水稻的分子检测 | 第35-36页 |
3 结果与分析 | 第36-51页 |
·RNA 完整性检测 | 第36页 |
·OSRACK1 基因CDNA 第一链的合成 | 第36-37页 |
·PCR 扩增水稻OSRACK1 基因的CDNA | 第37-38页 |
·OSRACK1 基因CDNA 的克隆及鉴定 | 第38页 |
·OSRACK1 基因CDNA 的序列分析 | 第38-40页 |
·过表达OSRACK1 表达载体的鉴定 | 第40页 |
·抑制表达OSRACK1 表达载体的鉴定 | 第40-42页 |
·反义OSRACK1 表达载体的鉴定 | 第40-41页 |
·OSRACK1 RNAI 表达载体的鉴定 | 第41-42页 |
·含有过表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第42-43页 |
·含OSRACK1 抑制表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第43-44页 |
·含OSRACK1 反义重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第43-44页 |
·含OSRACK1 RNAI 重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第44页 |
·农杆菌介导的遗传转化和植株再生 | 第44-46页 |
·转基因水稻的GUS 组织化学活性检测 | 第46-47页 |
·转基因水稻的分子检测 | 第47-51页 |
·过表达转基因水稻的分子检测 | 第47-48页 |
·反义表达转基因水稻的分子检测 | 第48-49页 |
·RNAI 转基因水稻的分子检测 | 第49-51页 |
4 小结与讨论 | 第51-55页 |
·提取并获得水稻完整的总RNA | 第51页 |
·RT-PCR 法合成水稻OSRACK1CDNA | 第51-52页 |
·OSRACK1 基因的克隆及序列比对 | 第52页 |
·水稻OSRACK1 基因的表达载体的构建 | 第52页 |
·表达载体冻融法转化农杆菌 | 第52-53页 |
·农杆菌介导的遗传转化 | 第53页 |
·RNAI 的优缺点 | 第53-55页 |
参考文献 | 第55-64页 |
附录 | 第64-67页 |
1 OSRACK1 基因序列:(来源于NCBI ,蛋白编号为:NP-916988) | 第64-65页 |
2. 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第65页 |
3 水稻外植体的灭菌方法 | 第65页 |
4 水稻组织培养及转化过程中所用培养基 | 第65-67页 |
致谢 | 第67页 |