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八肋游仆虫中心蛋白性质和功能的研究

主要创新点第1-10页
略语表第10-11页
中文摘要第11-14页
英文摘要第14-17页
第一章 综述第17-45页
 §1.1 引言第17页
 §1.2 EF-手结构蛋白的性质第17-22页
     ·EF-手结构蛋白的概况和分类第17-18页
     ·EF-手结构蛋白的钙配位性质第18-20页
     ·成对的EF-手结构是蛋白功能单位第20页
     ·调节功能和结构功能第20-22页
 §1.3 中心蛋白的结构第22-24页
     ·中心蛋白的序列分析第22-24页
     ·中心蛋白的高级结构第24页
 §1.4 中心蛋白的作用机制第24-26页
 §1.5 中心蛋白的功能第26-33页
     ·绿藻中心蛋白第26-27页
     ·酵母中心蛋白第27-29页
     ·哺乳动物细胞中心蛋白第29-31页
     ·高等植物中心蛋白第31-32页
     ·原生生物中心蛋白第32-33页
 §1.6 本课题研究意义和设计思路第33-34页
     ·研究意义第33页
     ·设计思路第33-34页
 参考文献第34-45页
第二章 中心蛋白突变体和截短型重组质粒的构建第45-58页
 §2.1 引言第45页
 §2.2 材料第45-47页
     ·菌种与质粒第45页
     ·寡核苷酸第45-46页
     ·主要酶及生化试剂第46页
     ·主要试剂第46-47页
     ·主要仪器设备第47页
 §2.3 方法第47-52页
     ·重组质粒(pGEM-T-easy-centrin)的提取和鉴定第47-48页
     ·突变的重组质粒(pGEM-T-easy-M-centrin)构建第48-52页
     ·片段分子的基因片段第52页
 §2.4 实验结果第52-54页
     ·重组质粒(pGEM-T-easy-centrin)的提取和鉴定第52页
     ·突变的PCR产物扩增结果、酶切和PCR鉴定第52-53页
     ·片段分子的PCR产物扩增结果第53-54页
     ·突变的重组质粒pGEM-T-easy-M-Centrin序列测定第54页
 §2.5 讨论第54-55页
     ·突变的重组质粒(pGEM-T-easy-M-centrin)基因的构建第54页
     ·PCR实验第54-55页
 参考文献第55-58页
第三章 中心蛋白突变体和截短型的表达、纯化第58-71页
 §3.1 引言第58页
 §3.2 材料第58-60页
     ·菌种与质粒第58页
     ·主要酶及生化试剂第58-59页
     ·主要试剂第59-60页
     ·主要仪器设备第60页
 §3.3 方法第60-64页
     ·重组表达质粒pGEX-6p-1-M-centrin(或者片段基因)的构建第60-62页
     ·融合蛋白的表达鉴定第62页
     ·目标蛋白的分离纯化第62-64页
 §3.4 实验结果第64-68页
     ·突变的重组质粒pGEX-6P-1-M-Centrin酶切和PCR鉴定第64-65页
     ·截短型重组载体的酶切鉴定第65页
     ·重组菌的小量试表达第65-66页
     ·蛋白的纯化第66-67页
     ·截短型P23、P123的表达和纯化第67-68页
 §3.5 讨论第68-69页
     ·突变蛋白和截短蛋白一级结构分析第68页
     ·重组蛋白的表达和纯化第68-69页
 参考文献第69-71页
第四章 中心蛋白的金属离子结合性质第71-87页
 §4.1 引言第71页
 §4.2 材料第71-72页
     ·主要试剂第71-72页
     ·仪器第72页
 §4.3 方法第72-73页
     ·稀土离子(Tb~(3+))储备液的配制第72页
     ·不同缓冲液的样品的制备第72页
     ·蛋白浓度测定第72页
     ·紫外光谱的测定第72页
     ·荧光光谱的测定第72-73页
     ·圆二色谱的测定第73页
 §4.4 实验结果第73-83页
     ·中心蛋白野生型(Cen)和G115W的紫外光谱第73页
     ·脱钙中心蛋白野生型(Cen)和G115W与钙结合的紫外差光谱第73-74页
     ·脱钙中心蛋白野生型(Cen)和G115W与钙和铽结合的CD谱第74-75页
     ·不同离子和Cen结合的构象变化第75-76页
     ·Cen结合Ca~(2+)和Tb~(3+)后的聚合现象第76-77页
     ·中心蛋白野生型(Cen)和G115W的荧光光谱第77-79页
     ·Cen和G115W对铽离子的敏化荧光光谱第79-81页
     ·P123和P23对铽离子的敏化荧光光谱第81-82页
     ·D37K、D73K和D146K对铽离子的敏化荧光光谱第82-83页
 §4.5 讨论第83-85页
     ·金属结合位点的亲和性第83-84页
     ·loop区第一个氨基酸D的重要性第84页
     ·EF-hand结构的协同性第84-85页
 参考文献第85-87页
第五章 中心蛋白的聚合性质第87-99页
 §5.1 引言第87页
 §5.2 材料第87-88页
     ·主要试剂第87页
     ·Nature-PAGE相关试剂第87-88页
     ·仪器第88页
 §5.3 方法第88页
     ·稀土离子(Tb~(3+))储备液的配制第88页
     ·TNS溶液的配制第88页
     ·样品的制备第88页
     ·蛋白浓度测定第88页
     ·荧光光谱的测定第88页
     ·Nature-PAGE凝胶电泳第88页
 §5.4 实验结果第88-96页
     ·共振光散射第88-89页
     ·中心蛋白的聚合行为第89-90页
     ·蛋白浓度对聚合的影响第90页
     ·温度对聚合的影响第90-91页
     ·pH对聚合的影响第91页
     ·离子强度对聚合的影响第91-92页
     ·TNS对聚合的影响第92-93页
     ·片段分子P23、P123的聚合现象第93-94页
     ·突变体D37K、D73K和D146K的聚合行为第94-95页
     ·Nature-PAGE电泳检测中心蛋白聚合行为第95-96页
 §5.5 讨论第96-97页
     ·聚合的性质第96页
     ·聚合的本质第96-97页
 参考文献第97-99页
第六章 TNS检测中心蛋白结合金属后的构象变化第99-112页
 §6.1 引言第99页
 §6.2 材料第99页
     ·主要试剂第99页
     ·主要仪器第99页
 §6.3 方法第99-100页
     ·储备液的配制第99-100页
     ·蛋白样品的制备第100页
     ·光谱的测定第100页
 §6.4 实验结果第100-108页
     ·中心蛋白和TNS作用的荧光光谱第100页
     ·中心蛋白和TNS结合第100-104页
     ·TNS和突变体G115W的色氨酸残基间的能量转移第104-106页
     ·Cen-TNS与Tb~(3+)结合的荧光光谱第106-107页
     ·D37K-TNS、D73K-TNS与Tb~(3+)的结合第107页
     ·P123-TNS、P23-TNS与Tb~(3+)的结合第107-108页
     ·不同离子对P23构象变化的比较第108页
 §6.5 讨论第108-110页
     ·中心蛋白结合金属离子后发生构象变化第108-109页
     ·不同金属对构象变化的影响第109-110页
 参考文献第110-112页
第七章 中心蛋白和蜂毒素的作用第112-121页
 §7.1 引言第112页
 §7.2 材料第112页
     ·主要试剂第112页
     ·仪器第112页
 §7.3 方法第112-113页
     ·储备液的配制第112页
     ·蛋白样品的制备第112页
     ·蜂毒素储备液的配制第112-113页
     ·荧光光谱第113页
 §7.4 实验结果第113-117页
     ·中心蛋白和蜂毒素的结合第113-114页
     ·金属离子对中心蛋白和蜂毒素结合的影响第114-115页
     ·pH对中心蛋白和蜂毒素结合的影响第115页
     ·TNS对中心蛋白和蜂毒素结合的影响第115-116页
     ·片段分子P23、P123与蜂毒素的作用第116-117页
     ·G115W与蜂毒素的作用第117页
 §7.5 讨论第117-119页
     ·中心蛋白和蜂毒素的结合第117-118页
     ·中心蛋白和蜂毒素的作用模式第118-119页
     ·中心蛋白和蜂毒素的作用力第119页
 参考文献第119-121页
第八章 中心蛋白和三氟啦嗪的作用第121-128页
 §8.1 引言第121页
 §8.2 材料第121-122页
     ·主要试剂第121-122页
     ·仪器第122页
 §8.3 方法第122页
     ·储备液的配制第122页
     ·蛋白样品的制备第122页
     ·TFP储备液的配制第122页
     ·荧光光谱第122页
 §8.4 实验结果第122-126页
     ·TFP的光谱性质第122-123页
     ·TFP和中心蛋白作用的荧光光谱第123-124页
     ·TFP和P23、P123的作用的荧光光谱研究第124-125页
     ·TFP对中心蛋白聚合性质的影响第125-126页
     ·TFP对中心蛋白与蜂毒素结合的影响第126页
 §8.5 讨论第126-127页
     ·TFP和中心蛋白的结合位点第126-127页
     ·TFP对中心蛋白的生物功能的阻断第127页
 参考文献第127-128页
工作总结和展望第128-130页
 §工作总结第128-129页
 §展望第129-130页
攻读博士学位期间发表和待发表的论文第130-132页
致谢第132-133页

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