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我国马传染性贫血弱毒疫苗株与美洲流行毒株鉴别诊断方法的建立及标记疫苗的研究

第一章 绪论第1-29页
   ·EIAV的概述第15-20页
   ·EIAV主要基因的变异研究进展第20-24页
   ·EIAV非结构蛋白的研究概况第24-27页
   ·本试验的目的和意义第27-29页
第二章 马传染性贫血病毒阿根廷流行毒株前病毒全基因序列测定与分析第29-40页
   ·材料第29-30页
     ·毒株第29页
     ·试验动物第29页
     ·试剂第29页
     ·仪器第29页
     ·质粒的小量提取第29-30页
   ·方法第30-31页
     ·试验动物的接种第30页
     ·马外周血单核细胞的制备第30页
     ·前病毒DNA的提取第30页
     ·前病毒全基因的分段扩增第30-31页
     ·前病毒各基因片段PCR产物的克隆与测序第31页
   ·结果第31-38页
     ·前病毒全基因的分段扩增第31-33页
     ·各段基因的克隆与鉴定第33-35页
     ·Agen-EIAV株各基因片段的序列测定及全基因序列的拼接第35页
     ·Agen-EIAV株与DLV、LN和AF028232株各基因核苷酸序列比较第35-36页
     ·Agen-EIAV株与DLV、LN和AF028232,AF033820,AF016316,M16575株gag核苷酸及其编码蛋白的比较第36-37页
     ·Agen-EIAV株与DLV、LN和AF028232,AF033820,AF016316,M16575株gp90核苷酸及其编码蛋白的比较第37-38页
   ·讨论第38-40页
第三章 马传染性贫血病毒阿根廷流行毒株前病毒gag和gp90在马体内的变异分析第40-48页
   ·材料第40-41页
     ·毒株第40页
     ·试验动物第40页
     ·试剂第40-41页
     ·仪器第41页
   ·方法第41-42页
     ·四个发热期马外周血的采集、PBMC的制备及 DNA的提取第41页
     ·四个发热期gag和gp90核苷酸序列的扩增第41-42页
     ·四个发热期gag和gp90PCR产物的克隆与测序第42页
   ·结果第42-46页
     ·四个发热期gag和gp90的PCR扩增第42页
     ·四个发热期gag和gp90的克隆与鉴定第42-43页
     ·四个发热期gag和gp90不同克隆的序列测定第43页
     ·四个发热期gag核苷酸序列比较第43-44页
     ·四个发热期gp90核苷酸序列及氨基酸比较第44-46页
   ·讨论第46-48页
第四章 我国马传染性贫血病弱毒疫苗株与美洲流行毒株鉴别诊断方法的建立第48-60页
   ·材料第48-49页
     ·毒株第48页
     ·试验动物第48页
     ·试剂第48页
     ·仪器第48-49页
   ·方法第49-52页
     ·病毒培养第49页
     ·马外周血单核细胞的制备第49页
     ·引物的设计与合成第49-50页
     ·模板的制备第50页
     ·β-actin克隆及序列测定第50页
     ·每个 DNA样本质量的检测第50页
     ·病毒培养物 PCR检测条件的摸索第50-51页
     ·套式多重 PCR鉴别诊断方法的建立第51页
     ·试验动物样品的检测第51页
     ·扩增目的条带的克隆及序列测定第51页
     ·敏感性试验第51-52页
     ·稳定性和重复性试验第52页
   ·结果第52-58页
     ·β-actin基因的扩增第52页
     ·β-actin基因克隆的序列测定第52-53页
     ·病毒接种细胞培养物套式多重PCR鉴别诊断方法的初步建立第53页
     ·扩增目的条带的克隆及序列测定第53页
     ·试验动物 PCR检测条件的优化及样本的检测第53-54页
     ·PCR检测的敏感性试验第54-55页
     ·稳定性和重复性试验第55-57页
     ·动物试验PCR检测结果第57-58页
     ·动物试验 PCR检测与琼脂扩散试验检测结果的比较第58页
   ·讨论第58-60页
第五章 马传染性贫血病标记疫苗的研究第60-88页
   ·材料第60-63页
     ·细胞第60页
     ·试剂第60-61页
     ·引物第61-63页
     ·质粒的小量提取第63页
   ·方法第63-72页
     ·驴胎皮肤细胞的制备、培养第63页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2的构建第63-66页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2突变序列的测定第66页
     ·质粒的提取和纯化第66-67页
     ·质粒在细胞培养中的转染和传代第67-68页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2突变序列的测定第68-71页
     ·嵌合病毒复制动力学分析第71-72页
   ·结果第72-85页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2的构建及鉴定第72-75页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2突变序列的测定第75-76页
     ·重组感染性克隆pLG-5B19和pLG-np2的转染第76-82页
     ·衍生病毒在 FDD细胞培养的生物学特性研究第82-85页
   ·讨论第85-88页
第六章 结论第88-89页
参考文献第89-103页
附录第103-116页
致谢第116-117页
作者简历第117页

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