| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-21页 |
| ·微生物与重金属的相互作用 | 第7-13页 |
| ·重金属污染 | 第7-8页 |
| ·重金属对微生物的毒害作用 | 第8-9页 |
| ·微生物对重金属的抗性及解毒作用 | 第9-13页 |
| ·细胞表面吸附 | 第9页 |
| ·微生物累积 | 第9-10页 |
| ·细胞膜成分与通透性改变的抗性适应 | 第10页 |
| ·微生物对重金属的转化作用 | 第10-11页 |
| ·输出系统对重金属的作用 | 第11-12页 |
| ·金属硫化物和金属磷化物 | 第12页 |
| ·抗重金属基因的功能分析 | 第12-13页 |
| ·铜在生物体内的平衡 | 第13-16页 |
| ·铜在生物体内的作用 | 第13-14页 |
| ·生物体内转运铜的相关蛋白 | 第14-16页 |
| ·ATX1蛋白 | 第15页 |
| ·LYS7蛋白 | 第15-16页 |
| ·COX17蛋白 | 第16页 |
| ·铜转运P-type ATPase结构与功能 | 第16-19页 |
| ·RNA干扰技术成为基因功能研究的有力手段 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和载体质粒 | 第21页 |
| 本工作用到的菌株和载体质粒 | 第21页 |
| ·抗菌素及使用浓度 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·使用的试剂 | 第22页 |
| ·试剂配置 | 第22-23页 |
| ·本研究所使用的引物 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-34页 |
| ·质粒DNA提取 | 第24页 |
| ·DNA片段的酶切、回收、连接 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·Penicillium janthinillum GXCR总RNA提取 | 第25-26页 |
| ·以Penicillium janthinillum GXCR总RNA为模板合成cDNA第一链 | 第26页 |
| ·P型ATP酶基因cDNA部分序列扩增 | 第26-27页 |
| ·用作构建RNA干扰重组载体pCPXBn-ihp1的413bp序列的扩增 | 第27页 |
| ·Penicillium janthinillum GXCR总DNA制备 | 第27页 |
| ·Southern杂交 | 第27-29页 |
| ·Southern转移 | 第27-28页 |
| ·探针端标记 | 第28页 |
| ·DNA分子杂交 | 第28页 |
| ·放射自显影 | 第28-29页 |
| ·原生质体制备 | 第29-30页 |
| ·原生质体的再生 | 第30页 |
| ·DNA转化原生质体 | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第30-32页 |
| ·实时荧光定量PCR反应建立 | 第31页 |
| ·实时荧光定量PCR反应条件 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量PCR实验数据的处理 | 第32页 |
| ·野生型Penicillium janthinillum GXCR与干扰后突变体抗铜能力的检测 | 第32-34页 |
| ·Penicillium janthinillum GXCR菌株与RNA干扰突变体菌落形态的观察 | 第32页 |
| ·CuSo_4对菌株生长量的影响 | 第32页 |
| ·Penicillium janthinillum GXCR菌株与RNA干扰突变体镜检分析 | 第32-33页 |
| ·细胞内铜含量测定 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-46页 |
| ·菌株GXCR铜转运P型ATP酶基因cDNA部分序列的扩增 | 第34-37页 |
| ·简并引物的获得 | 第34页 |
| ·菌株GXCR第一链cDNA的获得 | 第34页 |
| ·铜转运P型ATP酶基因cDNA部分序列的扩增 | 第34-36页 |
| ·DNA杂交验证 | 第36-37页 |
| ·菌株GXCR铜转运P型ATP酶基因RNA干扰重组表达载体pCPXBn—ihp1的构建 | 第37-39页 |
| ·中间载体pUCCRNAi—inf的获得 | 第37-38页 |
| ·RNA干扰重组表达载体构建 | 第38-39页 |
| ·干扰重组表达载体转化菌株GXCR原生质体 | 第39-41页 |
| ·原生质体转化及验证 | 第39-40页 |
| ·转化子DNA杂交分析 | 第40-41页 |
| ·干扰突变体的铜转运P型ATP酶基因的表达分析 | 第41页 |
| ·野生型Penicillium janthinillum GXCR与干扰后突变体抗铜能力的分析 | 第41-46页 |
| ·正常培养条件下生长情况 | 第41-42页 |
| ·铜对菌株生长的影响 | 第42页 |
| ·CuSO_4对菌株生长量影响的分析分析 | 第42-43页 |
| ·形态镜检分析 | 第43-45页 |
| ·野生型和突变体细胞内铜含量检测 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第46-48页 |
| ·应用于Penicillium janthinillum GXCR RNA干扰重组表达载体的构建 | 第46页 |
| ·铜转运P型ATP酶 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第58页 |
