| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的说明 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 前言 | 第8-33页 |
| 1 植酸的研究 | 第8-11页 |
| 2 植酸酶的研究应用 | 第11-22页 |
| 3 本项研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 4 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统研究 | 第23-33页 |
| 第二部分 试验部分 | 第33-67页 |
| 1 实验材料 | 第33-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-35页 |
| ·酶与试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·常用贮液 | 第36-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-48页 |
| ·E.coli质粒的大量提取与纯化 | 第38-39页 |
| ·PCR克隆phyB基因 | 第39-40页 |
| ·DNA(phyB基因)快速纯化与回收 | 第40页 |
| ·phyB基因克隆到T载体 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌(E.coli DH5a)感受态细胞制备方法 | 第41页 |
| ·大肠杆菌转化方法(E.coliDH5a) | 第41-42页 |
| ·E.coli质粒的小量提取 | 第42页 |
| ·重组质粒pPIC9K—PhyB的构建 | 第42-44页 |
| ·重组质粒pPIC9K—PhyB的线性化 | 第44页 |
| ·毕赤酵母细胞感受态的制备及转化 | 第44-45页 |
| ·转化子筛选方法和PCR鉴定 | 第45页 |
| ·酵母细胞基因组的提取 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第46页 |
| ·植酸酶活力测定原理及方法 | 第46-47页 |
| ·重组酸性植酸酶的诱导表达及酶学性质 | 第47-48页 |
| 3 实验结果与分析 | 第48-64页 |
| ·酸性植酸酶基因PCR扩增 | 第48-49页 |
| ·酸性植酸酶基因的T克隆及鉴定 | 第49-51页 |
| ·重组质粒pPIC9K—PhyB的构建及鉴定 | 第51-55页 |
| ·基因整合转化酵母细胞 | 第55-60页 |
| ·酵母转化子基因组的PCR鉴定 | 第60-61页 |
| ·酸性植酸酶PhyB的诱导培养及定性鉴定 | 第61-62页 |
| ·酸性植酸酶phyB的酶学性质 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 6 下一步工作设想 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78页 |