| 一、中文摘要 | 第1-9页 |
| 二、英文摘要 | 第9-11页 |
| 三、中英文缩略表 | 第11-13页 |
| 四、引言 | 第13-24页 |
| 1. 兔病毒性出血症及检测方法的研究进展 | 第13-18页 |
| ·病原学研究 | 第13-14页 |
| ·流行病学研究 | 第14-15页 |
| ·诊断方法的研究 | 第15-18页 |
| 2. 实时定量PCR 研究进展 | 第18-24页 |
| ·荧光染料 | 第19页 |
| ·TaqMan 探针 | 第19-20页 |
| ·Amplisensor(Biotronics) | 第20-21页 |
| ·Molecular beacon | 第21页 |
| ·Lightcycler | 第21页 |
| ·复合探针法(complex probes) | 第21-22页 |
| ·Taqman－MB 荧光探针定量PCR 技术 | 第22页 |
| ·荧光双链引物法 | 第22-23页 |
| ·通用探针法 | 第23页 |
| ·荧光引物法 | 第23-24页 |
| 五、研究内容 | 第24-49页 |
| 试验一 荧光定量PCR 检测RHDV 标准品质粒的制备 | 第24-33页 |
| 1. 材料 | 第24-26页 |
| ·毒株 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| ·质粒与菌种 | 第25页 |
| ·所使用软件 | 第25页 |
| ·试验用各种培养基和溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2. 方法 | 第26-30页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·病毒的增殖 | 第27页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第27页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第27页 |
| ·PCR 产物的电泳 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物与载体的连接 | 第29页 |
| ·质粒的转化 | 第29页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| ·测序分析 | 第30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-31页 |
| ·PCR 和电泳结果 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的菌落PCR 鉴定结果 | 第31页 |
| ·测序结果 | 第31页 |
| ·与原基因序列的比较分析 | 第31页 |
| 4. 讨论 | 第31-33页 |
| 试验二 兔病毒性出血症荧光定量检测方法的建立 | 第33-42页 |
| 1. 材料 | 第33页 |
| ·毒株 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·分子生物学试剂 | 第33页 |
| 2. 方法 | 第33-36页 |
| ·引物对的设计 | 第33-34页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第34页 |
| ·反转录反应 | 第34页 |
| ·常规RT-PCR检测方法 | 第34页 |
| ·线性标准曲线的绘制 | 第34-36页 |
| ·实时荧光PCR 反应系统相关参数确定 | 第36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·普通PCR 的检测 | 第36-37页 |
| ·标准曲线 | 第37页 |
| ·反应体系的优化 | 第37-38页 |
| ·荧光PCR 检测 | 第38页 |
| ·循环参数的优化 | 第38页 |
| ·荧光 PCR 灵敏性的检测 | 第38-39页 |
| ·荧光 PCR 特异性的检测 | 第39页 |
| ·荧光PCR 重复性检测 | 第39页 |
| ·组装试剂盒 | 第39页 |
| 4. 讨论 | 第39-42页 |
| 试验三 荧光定量PCR 在RHD 快速检测中的应用 | 第42-49页 |
| 1. 材料 | 第42-43页 |
| ·毒株 | 第42页 |
| ·试验兔 | 第42页 |
| ·临床样品 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| 2. 方法 | 第43-45页 |
| ·病料采取 | 第43页 |
| ·阳性血清的制备 | 第43页 |
| ·阴性血清 | 第43页 |
| ·荧光PCR 的检测 | 第43-44页 |
| ·常规PCR 检测 | 第44页 |
| ·血凝与血凝抑制试验 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-47页 |
| ·攻毒结果 | 第45页 |
| ·荧光PCR检测结果 | 第45-46页 |
| ·三种检测方法的比较 | 第46页 |
| ·发病死亡兔各脏器含毒量比较 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-49页 |
| ·较传统检测方法敏感性和特异性高 | 第47-48页 |
| ·兔病毒性出血症的预防 | 第48-49页 |
| 六、结论 | 第49-50页 |
| 七、参考文献 | 第50-59页 |
| 八、致谢 | 第59-60页 |
| 九、个人简介及攻读学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 十、附录 | 第61-70页 |
| 1. 测序结果 | 第61-64页 |
| 2. Blast 结果 | 第64-67页 |
| 3. 试剂盒说明书 | 第67-70页 |