| 中文摘要 | 第1-25页 |
| 英文摘要 | 第25-34页 |
| 第一章 文献综述 | 第34-60页 |
| 1 蝎神经毒素概述 | 第34-45页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·蝎神经毒素的性质 | 第34-39页 |
| ·一般理化性质 | 第34-35页 |
| ·东亚钳蝎毒素的电生理特性 | 第35-39页 |
| ·蝎毒素基因分子生物学研究 | 第39-40页 |
| ·蝎毒素cDNA结构及翻译后的加工 | 第39页 |
| ·蝎毒素基因组织结构及其mRNA的加工 | 第39-40页 |
| ·蝎神经毒素的结构与功能的研究 | 第40-43页 |
| ·长链蝎毒素的结构与功能研究 | 第41-43页 |
| ·短链蝎毒素的结构与功能研究 | 第43页 |
| ·蝎神经毒素的基因工程 | 第43-45页 |
| ·重组蝎毒素在原核细胞中的表达 | 第43-44页 |
| ·重组蝎毒素在真核细胞中的表达 | 第44-45页 |
| 2 电压门控氯离子通道(CLC)的研究进展 | 第45-49页 |
| ·引言 | 第45-46页 |
| ·CLC通道的种类与分布 | 第46-47页 |
| ·CLC通道的特点 | 第47-48页 |
| ·拓扑结构 | 第47-48页 |
| ·CLC通道的双桶状结构 | 第48页 |
| ·CLC通道的药理学性质 | 第48页 |
| ·与CLC通道相关的疾病 | 第48-49页 |
| ·神经胶质瘤细胞中氯通道的研究 | 第49页 |
| 3 论文的设计思路 | 第49-52页 |
| ·实验背景：蝎氯离子通道毒素及其在治疗人脑神经胶质瘤中的潜在价值 | 第49-51页 |
| ·实验的目的、技术方案流程及创新点 | 第51-52页 |
| 4 参考文献 | 第52-60页 |
| 第二章 利用搭桥PCR法人工优化合成东亚钳蝎类氯离子通道神经毒素(rBmK CTa)基因及其在大肠杆菌中的分泌表达、纯化与鉴定 | 第60-97页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-80页 |
| ·实验材料 | 第61-64页 |
| ·主要试剂的配制 | 第64-67页 |
| ·实验方法 | 第67-80页 |
| ·东亚钳蝎类氯离子通道神经毒素rBmK CTa全基因合成策略 | 第67-73页 |
| ·表达质粒pExSecI-rBmK CTa和pExSecI-Bm-12的构建 | 第73-77页 |
| ·rBmK CTa基因的诱导表达及表达量的对比分析 | 第77-78页 |
| ·融合ZZ-rBmK CTa蛋白的纯化和切割 | 第78-79页 |
| ·rBmK CTa蛋白的Western blot鉴定 | 第79-80页 |
| 3 实验结果 | 第80-87页 |
| ·搭桥PCR法合成东亚钳蝎类氯离子通道神经毒素rBmK CTa基因 | 第80-81页 |
| ·表达质粒pExSecI-rBmK CTa和pExSecI-Bm-12的构建 | 第81-82页 |
| ·重组菌的诱导表达分析 | 第82-83页 |
| ·分泌融合蛋白的表达与纯化 | 第83-85页 |
| ·IgG-Sepharose亲和层析 | 第83-84页 |
| ·Superdex75凝胶过滤层析 | 第84-85页 |
| ·羟胺切割重组融合蛋白ZZ—rBmK CTa及其产物分离纯化 | 第85页 |
| ·Western blot分析 | 第85-87页 |
| ·蛋白表达量的分析 | 第87页 |
| 4 讨论 | 第87-93页 |
| ·rBmK CTa基因的合成 | 第87-88页 |
| ·东亚钳蝎类氯离子通道神经毒素蛋白的序列分析 | 第88-90页 |
| ·rBmK CTa的表达及纯化分析 | 第90-92页 |
| ·羟胺切割条件的分析 | 第92-93页 |
| 5 参考文献 | 第93-97页 |
| 第三章 东亚钳蝎毒素rBmK CTa的动物急性毒性和细胞毒性分析 | 第97-113页 |
| 1 引言 | 第97页 |
| 2 材料与方法 | 第97-102页 |
| ·实验材料 | 第97-98页 |
| ·实验方法 | 第98-102页 |
| ·动物急性毒性实验设计 | 第99页 |
| ·细胞毒性实验设计 | 第99-102页 |
| 3 实验结果 | 第102-110页 |
| ·切割后rBmK CTa对小鼠的急性毒性实验和LD_(50)的确定 | 第102-104页 |
| ·Wistar大鼠的乳鼠脑海马区神经胶质细胞的提取和培养 | 第104页 |
| ·预实验结果：纯化后的重组蛋白(ZZ—rBmK CTa)和切割后的rBmK CTa蛋白对正常鼠神经胶质细胞的毒性分析 | 第104-107页 |
| ·人神经胶质瘤细胞株SHG-44的培养 | 第107-108页 |
| ·rBmK CTa蛋白对正常鼠神经胶质细胞和人神经胶质细胞瘤SHG-44毒性的对比分析 | 第108页 |
| ·rBmK CTa蛋白对人白血病细胞株HL-60的毒性作用 | 第108-110页 |
| 4 讨论 | 第110-111页 |
| ·rBmK CTa毒素对人神经胶质细胞瘤SHG-44的毒性与其它蝎毒素细胞毒性的对比分析 | 第110页 |
| ·rBmK CTa毒素在治疗人脑神经胶质瘤中的潜在价值 | 第110-111页 |
| 5 参考文献 | 第111-113页 |
| 第四章 膜片钳技术对东亚钳蝎类氯离子神经毒素(rBmK CTa)电生理学性质的确定 | 第113-131页 |
| 1 引言 | 第113-120页 |
| ·膜片钳技术原理 | 第113-114页 |
| ·膜片钳的记录模式 | 第114-115页 |
| ·细胞吸附模式(On-cell mode) | 第115页 |
| ·膜内面向外模式(Inside-out mode) | 第115页 |
| ·全细胞模式(Whole-cell mode) | 第115页 |
| ·膜外面向外模式(Outside-side mode) | 第115页 |
| ·全细胞记录法基本实验操作 | 第115-117页 |
| ·全细胞记录法的应用 | 第117-119页 |
| ·离子通道宏观性质的分析 | 第117页 |
| ·离子通道微观性质分析 | 第117-118页 |
| ·离子通道的结构分析 | 第118页 |
| ·载体运输的性质和机能分析 | 第118页 |
| ·细胞内信息传递的分析 | 第118页 |
| ·细胞膜电容的测定 | 第118-119页 |
| ·对单细胞基因表达的分析 | 第119页 |
| ·全细胞膜片钳记录法的不足 | 第119页 |
| ·采用全细胞膜片钳技术确定东亚钳蝎rBmK CTa蛋白的性质 | 第119-120页 |
| 2 材料与方法 | 第120-122页 |
| ·实验材料 | 第120-121页 |
| ·仪器 | 第120页 |
| ·所需溶液的配制 | 第120-121页 |
| ·实验方法 | 第121-122页 |
| ·电极拉制及电极内液的充灌 | 第121页 |
| ·实验参数的设置 | 第121页 |
| ·细胞的准备和外理 | 第121-122页 |
| ·膜片钳实验 | 第122页 |
| ·数据处理 | 第122页 |
| 3 实验结果 | 第122-126页 |
| ·rBmK CTa对人神经胶质瘤细胞株SHG—44氯离子通道的影响 | 第122-124页 |
| ·rBmK CTa对人神经胶质瘤细胞株SHG—44钾离子通道的影响 | 第124页 |
| ·rBmK CTa对人神经胶质瘤细胞株SHG—44钠离子通道的影响 | 第124-126页 |
| 4 讨论 | 第126-127页 |
| ·人神经胶质瘤细胞膜上的氯离子通道 | 第126页 |
| ·rBmK CTa的电生理学性质的确定 | 第126-127页 |
| 5 参考文献 | 第127-131页 |
| 第五章 东亚钳蝎毒素rBmK CTa的多克隆抗体制备及利用Far Western法探测其在SHG-44上的受体 | 第131-148页 |
| 1 引言 | 第131页 |
| ·抗体概述 | 第131页 |
| ·本章研究的目的和意义 | 第131页 |
| 2 材料与方法 | 第131-136页 |
| ·材料 | 第131-133页 |
| ·主要仪器设备 | 第131-132页 |
| ·主要试剂 | 第132页 |
| ·试剂的配制 | 第132-133页 |
| ·实验方法 | 第133-136页 |
| ·抗原的制备 | 第133页 |
| ·抗血清的制备 | 第133-134页 |
| ·ELISA法检测抗体效价 | 第134页 |
| ·东亚钳蝎毒腺总蛋白提取 | 第134页 |
| ·东亚钳蝎毒总蛋白提取物的免疫印迹 | 第134-135页 |
| ·Far Western法探测rBmK CTa在SHG—44上的受体蛋白 | 第135页 |
| ·Pull Down实验获得受体蛋白 | 第135页 |
| ·受体蛋白的N-端测序 | 第135-136页 |
| 3 实验结果 | 第136-140页 |
| ·rBmK CTa抗血清的效价检测 | 第136页 |
| ·东亚钳蝎的培养及毒腺总蛋白提取 | 第136-138页 |
| ·东亚钳蝎毒总蛋白提取物的免疫印迹 | 第138页 |
| ·Far Western法探测rBmK CTa在SHG—44上的受体蛋白 | 第138-139页 |
| ·Pull Down实验获得受体蛋白 | 第139-140页 |
| ·受体蛋白的N-端测序 | 第140页 |
| 4 讨论 | 第140-147页 |
| ·rBmK CTa多克隆抗体的特异性 | 第140-142页 |
| ·Far Western方法获得已知蛋白互相作用的未知受体的研究 | 第142-143页 |
| ·蛋白质氨基酸测序的有关要求 | 第143页 |
| ·35 kDa蛋白前6个氨基酸的Blast分析 | 第143-147页 |
| 5 参考文献 | 第147-148页 |
| 第六章 东亚钳蝎毒素rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠主要器官的影响 | 第148-162页 |
| 1 引言 | 第148页 |
| ·石蜡切片技术 | 第148页 |
| ·检测rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠各组织器官的影响的意义 | 第148页 |
| 2 材料与方法 | 第148-152页 |
| ·实验材料 | 第148-149页 |
| ·实验动物 | 第148页 |
| ·实验仪器 | 第148-149页 |
| ·主要试剂的配制 | 第149页 |
| ·实验方法 | 第149-152页 |
| ·动物的处理 | 第149页 |
| ·石蜡切片的制作 | 第149-152页 |
| 3 实验结果 | 第152-155页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠肾组织的影响 | 第152页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠大脑组织的影响 | 第152页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠脾脏组织的影响 | 第152-153页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠肝脏组织的影响 | 第153页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠腿部骨骼肌肉组织的影响 | 第153页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠肺组织的影响 | 第153-155页 |
| ·rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠心脏组织的影响 | 第155页 |
| 4 讨论 | 第155-159页 |
| ·东亚钳蝎毒素rBmK CTa在药理浓度作用下对小鼠七种组织器官的影响 | 第155-157页 |
| ·以色列蝎(Leiurus Quinquestriatus)Chlorotoxin的药理学性质研究 | 第157页 |
| ·石蜡切片法与其他技术方法的结合 | 第157-159页 |
| ·与免疫学技术结合 | 第157-158页 |
| ·石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析 | 第158-159页 |
| ·石蜡切片标本是形态计量技术的基础 | 第159页 |
| 5 参考文献 | 第159-162页 |
| 第七章 东亚钳蝎毒素类氯离子通道神经毒素rBmK CTa蛋白的晶体生长条件的初步探索 | 第162-177页 |
| 1 引言 | 第162-168页 |
| ·蛋白质结构测定的主要过程 | 第163-164页 |
| ·蛋白质结晶 | 第164-166页 |
| ·蛋白质结晶的原理 | 第164页 |
| ·结晶方法和技术 | 第164-166页 |
| ·相位问题 | 第166-168页 |
| ·确定相位的主要方法 | 第166-168页 |
| 2 材料与方法 | 第168-171页 |
| ·实验材料 | 第168页 |
| ·实验方法 | 第168-171页 |
| ·晶体生长的方法 | 第168-169页 |
| ·晶体生长筛选条件的缓冲液配方 | 第169-171页 |
| 3 实验结果 | 第171-174页 |
| ·rBmK CTa结晶条件的摸索 | 第171-174页 |
| 4 结果讨论 | 第174页 |
| 5 参考文献 | 第174-177页 |
| 总结与展望 | 第177-181页 |
| 附录Ⅰ 略语表 | 第181-183页 |
| 附录Ⅱ | 第183-186页 |
| 一.个人简介 | 第183页 |
| 二.攻读博士学位期间发表的论文 | 第183-185页 |
| 三.主持和参与的科研项目 | 第185页 |
| 四.奖励情况 | 第185-186页 |
| 致谢 | 第186-188页 |
| 承诺书 | 第188页 |
