| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 1 植物线粒体呼吸链 | 第9-10页 |
| 2 植物体内抗坏血酸的重要生物学功能 | 第10-11页 |
| 3 抗坏血酸与植物病理反应调控 | 第11-15页 |
| 4 植物体内抗坏血酸的的生物合成 | 第15-16页 |
| 5 本论文的研究目的与内容 | 第16-17页 |
| 第二章 GLDH编码基因序列的查找、比对及引物设计 | 第17-27页 |
| 1 GLDH编码基因序列的查找、比对 | 第17-19页 |
| 2 GLDH蛋白序列的查找、比对 | 第19-20页 |
| 3 目的片段的选取及比对分析 | 第20-21页 |
| ·挑选进行引物设计的cDNA序列 | 第20页 |
| ·挑选进行引物设计的AB048530片段与其它编号基因的比对情况 | 第20-21页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| 4 对目的片段酶切分析 | 第21-22页 |
| 5 载体构建移码分析 | 第22-24页 |
| ·AB048530原序列翻译表达顺序 | 第22页 |
| ·把转入T载体的目的片段通过EcoR I酶切后的序列情况 | 第22-23页 |
| ·pET-42a表达载体蛋白翻译表达顺序分析 | 第23页 |
| ·把目的片段从T载体上通过EcoR I酶切连入表达载体序列分析 | 第23-24页 |
| 6 讨论 | 第24-27页 |
| 第三章 GLDH编码基因片段的克隆与原核表达载体构建 | 第27-45页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-38页 |
| ·引物设计、合成与配制 | 第28页 |
| ·烟草总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·扩增GLDH编码基因的部分序列 | 第29-30页 |
| ·GLDH基因PCR产物克隆至T载体 | 第30-31页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·pGEM-T Easy载体连接反应产物转化DH5α感受态细胞 | 第31页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第31-33页 |
| ·pGEM-T-GLDH重组质粒的序列测定及同源性分析 | 第33页 |
| ·原核表达载体pET-42a的亚克隆及pET-42a质粒的制备 | 第33页 |
| ·原核表达质粒pET-GLDH的克隆 | 第33-36页 |
| ·pET-42a载体图谱 | 第36-37页 |
| ·原核表达质粒pET-GLDH的构建技术路线 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-44页 |
| ·GLDH总RNA的提取与鉴定 | 第38页 |
| ·RT-PCR法扩增GLDH基因 | 第38页 |
| ·GLDH基因PCR产物转入pGEM-T Easy载体 | 第38-41页 |
| ·重组质粒pGEM-T-GLDH的序列测定及同源性分析 | 第41页 |
| ·原核表达质粒pET-GLDH的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组质粒pET-GLDH的序列测定及同源性分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 GLDH编码基因片段的原核表达 | 第45-53页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-47页 |
| ·重组表达质粒pET-GLDH在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第45-47页 |
| ·用氯化钙法制备BL21(DE3)感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·pET-GLDH转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第46页 |
| ·IPTG诱导表达GLDH蛋白 | 第46页 |
| ·细胞总蛋白(TCP)组份SDS-PAGE分析样品处理 | 第46页 |
| ·表达产物的溶解性分析 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-52页 |
| ·重组表达质粒pET-GLDH在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达(总蛋白分析) | 第47-48页 |
| ·诱导蛋白可溶性分析 | 第48-52页 |
| ·不同诱导温度 | 第48-49页 |
| ·不同诱导时间 | 第49-50页 |
| ·不同IPTG诱导剂浓度 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 GLDH和呼吸复合物Ⅰ对烟草悬浮细胞中AsA合成的贡献 | 第53-58页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·标准曲线 | 第54-55页 |
| ·常温下GLDH和呼吸复合物Ⅰ对烟草悬浮细胞中AsA生物合成的贡献 | 第55页 |
| ·高温对烟草悬浮细胞AsA生物合成总活性的影响 | 第55页 |
| ·高温胁迫下烟草悬浮细胞中GLDH对AsA生物合成的贡献 | 第55-56页 |
| ·高温胁迫下烟草悬浮细胞中呼吸复合物Ⅰ对AsA生物合成的贡献 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 论文总结 | 第58页 |
| 后续工作设想 | 第58-59页 |
| 附录：培养基配方 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
