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内皮抑素及其噬菌体模拟肽抑制新血管形成研究

符号说明第1-9页
中文摘要第9-11页
英文摘要第11-13页
前言第13-16页
材料第16-19页
 1. 引物合成及测序第16页
 2. 细胞株、菌株、质粒第16-17页
 3. 抗体第17页
 4. 分子生物学工具酶第17页
 5. 细胞培养用品第17页
 6. 免疫试剂及免疫组化用品第17页
 7. 酵母培养特殊试剂第17页
 8. 蛋白纯化材料第17页
 9. 常用缓冲液及细菌培养基第17-18页
 10. 其他常规试剂第18页
 11. 实验动物及标本第18页
 12. 实验仪器第18-19页
方法与步骤第19-33页
 1. 重组蛋白在酵母宿主菌G5115 中诱导表达第19页
 2. 重组内皮抑素的纯化与鉴定第19-20页
 3. 蛋白浓度的测定(BCA 法)第20页
 4. 鼠免疫B 淋巴细胞的制备第20页
 5. 骨髓瘤细胞的培养第20-21页
 6. 饲养细胞的制备第21页
 7. 细胞融合与选择性培养第21页
 8. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化第21-22页
 9. 腹水型McAb 的制备与纯化第22页
 10. 杂交瘤细胞染色体的计数第22-23页
 11. 免疫共沉淀和免疫印迹(Western blot)第23页
 12. BIAcore分析第23-24页
 13. 总RNA 的提取与逆转录第24页
 14. PCR 扩增第24-25页
 15. 实时定量PCR第25页
 16. 目的基因的克隆第25页
 17. 质粒载体的鉴定与测序第25-26页
 18. 标本采集第26页
 19. 原代人脐静脉内皮细胞的分离、培养与鉴定第26-27页
 20. 鼠角膜新血管形成模型的建立第27页
 21. 角膜新血管长度的测量第27页
 22. 细胞增殖试验第27-28页
 23. 细胞粘附试验第28页
 24. 细胞迁移分析第28-29页
 25. 噬菌体滴度的测定第29页
 26. 噬菌体的扩增与纯化第29页
 27. 特异性结合噬菌体的生物淘洗第29-30页
 28. 竞争ELISA 鉴定单克隆噬菌体展示肽的结合特异性第30页
 29. 噬菌体单链DNA 的制备第30-31页
 30. 人脐静脉内皮细胞血管化形成分析第31页
 31. 明胶酶谱检测基质外金属蛋白酶活性第31页
 32. 免疫组织化学分析第31-33页
结果第33-61页
 第一部分:鼠抗人内皮抑素单抗隆抗体的制备、鉴定与生物学功能研究-第33-49页
  1. 重组人内皮抑素在毕赤酵母G5115 中的表达、纯化第33-36页
  2. 鼠抗人内皮抑素单抗隆抗体的制备第36-38页
  3. 鼠抗人内皮抑素单抗隆抗体的鉴定第38-43页
  4. 鼠抗人内皮抑素单抗隆抗体4E7 拮抗内皮抑素的生物学活性第43-49页
 第二部分:内皮抑素噬菌体模拟肽的筛选第49-56页
  1. 抗人内皮抑素单抗McAb 4E7 结合噬菌体的富集第49页
  2. 单克隆噬菌体对McAb 4E7 的竞争抑制ELISA 结果第49-51页
  3. 测序结果第51页
  4. 重组人内皮抑素及其模拟肽抑制新血管形成的生物活性研究第51-56页
 第三部分:内皮抑素抑制碱烧伤诱导的角膜新血管形成机制的初步探讨-第56-61页
  1. 内皮抑素促进碱烧伤角膜VEGF 的表达第56-57页
  2. 内皮抑素促进碱烧伤角膜MMP-2 和MMP-9 的表达第57-61页
讨论第61-69页
 第一部分:与内皮抑素具有高亲合力并能拮抗其部分功能的单克隆抗体的制备第61-63页
 第二部分:内皮抑素及其模拟短肽对碱烧伤诱导的角膜新血管形成的抑制作用第63-66页
 第三部分:内皮抑素促进碱烧伤角膜MMP-2、MMP-9 和VEGF 的表达第66-69页
结论与展望第69-71页
参考文献第71-80页
文献综述第80-88页
博士期间参与发表的文章第88-89页
博士期间的会议论文第89-90页
致谢第90页

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