| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-65页 |
| 1.RNA干扰 | 第14-34页 |
| ·RNA干扰的发现与机制 | 第14-21页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA干扰的机制 | 第15-21页 |
| ·RNA干扰与哺乳动物 | 第21-22页 |
| ·RNA干扰的应用前景 | 第22-27页 |
| ·疾病治疗 | 第22-24页 |
| ·基因功能的研究 | 第24-26页 |
| ·生物进化 | 第26-27页 |
| ·干细胞与细胞分化 | 第27页 |
| ·siRNA的设计及应用 | 第27-34页 |
| ·siRNA的设计 | 第27-29页 |
| ·siRNA的制备 | 第29-31页 |
| ·siRNA转染中的注意事项 | 第31-34页 |
| 2.细胞凋亡 | 第34-47页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第34-41页 |
| ·细胞凋亡的概念 | 第34-36页 |
| ·细胞凋亡的生理学意义 | 第36-37页 |
| ·细胞凋亡的病理学意义 | 第37-39页 |
| ·细胞凋亡的形态学变化 | 第39-40页 |
| ·细胞凋亡的生化改变 | 第40-41页 |
| ·细胞凋亡的检测方法 | 第41-47页 |
| ·DNA降解分析 | 第41-43页 |
| ·基于凋亡细胞膜通透性的染包方法 | 第43-44页 |
| ·细胞凋亡的相关蛋白分析 | 第44页 |
| ·细胞凋亡的酶学分析 | 第44-45页 |
| ·其他细胞凋亡的检测方法 | 第45-47页 |
| 3.Cyclin T1 | 第47-51页 |
| ·Cyclin T1克隆和表达 | 第48-50页 |
| ·Cyclin T1的生理功能 | 第50-51页 |
| 4.HIV-1 | 第51-65页 |
| ·HIV-1的分子生物学 | 第51-57页 |
| ·HIV-1的基因和基本结构 | 第51-52页 |
| ·HIV-1的信使RNA(mRNA) | 第52-53页 |
| ·结构蛋白 | 第53-55页 |
| ·调控蛋白 | 第55-56页 |
| ·酶 | 第56-57页 |
| ·Cyclin T1与HIV-1转录 | 第57-58页 |
| ·RNA干扰在抑制HIV-1复制中的应用 | 第58-65页 |
| ·干扰病毒基因的复制 | 第59-60页 |
| ·干扰病毒基因调控 | 第60-62页 |
| ·干扰宿主细胞相关基因表达 | 第62-65页 |
| 第二章 材料和方法 | 第65-79页 |
| 1.分子生物学实验技术 | 第65-72页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第65-67页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第65-66页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第66-67页 |
| ·超纯质粒DNA提取 | 第67页 |
| ·限制性酶切消化 | 第67页 |
| ·DNA片断的回收 | 第67-68页 |
| ·玻璃奶法 | 第67-68页 |
| ·试剂盒吲收 | 第68页 |
| ·DNA片断和载体的连接 | 第68页 |
| ·感受态的制备 | 第68-70页 |
| ·冷氯化钙法制备新鲜感受态细胞 | 第68-69页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第69页 |
| ·高效感受态细胞制备方法 | 第69-70页 |
| ·转化 | 第70-71页 |
| ·常规转化法 | 第70页 |
| ·质粒的快速转化法 | 第70-71页 |
| ·质粒的电转化法 | 第71页 |
| ·菌种的保存 | 第71-72页 |
| 2.细胞学实验技术 | 第72-76页 |
| ·细胞培养基的配置(以DMEM为例) | 第72页 |
| ·细胞传代培养 | 第72-73页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第73页 |
| ·冻存 | 第73页 |
| ·复苏 | 第73页 |
| ·脂质体转染 | 第73-74页 |
| ·流式细胞仪分析细胞亚G1峰 | 第74页 |
| ·萤火虫荧光素酶活性的检测 | 第74-75页 |
| ·原位末端标记检测(TUNEL) | 第75页 |
| ·X-gal染色 | 第75-76页 |
| 3.病毒学实验技术 | 第76-77页 |
| ·单复制周期HIV-1病毒粒子的收获及其相对P24浓度的检测 | 第76页 |
| ·单周期HIV-1病毒粒子感染U373-MAGI-CCR5E细胞 | 第76-77页 |
| 4.蛋白质化学实验技术 | 第77-79页 |
| ·SDS-PAGE | 第77页 |
| ·Western Blotting | 第77-79页 |
| 第三章 siRNA下调cyclin T1表达及对靶细胞的影响 | 第79-89页 |
| ·引言 | 第79页 |
| ·材料和方法 | 第79-83页 |
| ·siRNA的设计及shRNA表达质粒的克隆 | 第80页 |
| ·细菌、细胞及抗体 | 第80-81页 |
| ·细胞的脂质体转染 | 第81页 |
| ·Western blot检测 | 第81-82页 |
| ·流式细胞仪检测亚G1峰 | 第82-83页 |
| ·TUNEL标记分析 | 第83页 |
| ·研究结果 | 第83-87页 |
| ·设计的siRNA序列及shRNA表达质粒的构建和鉴定 | 第83-84页 |
| ·Western blot实验分析cyclin T1蛋白表达水平 | 第84-85页 |
| ·下调cyclin T1的表达对靶细胞的影响 | 第85-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 cyclin T1蛋白的下调对HIV-1复制的影响 | 第89-98页 |
| ·引言 | 第89-90页 |
| ·材料和方法 | 第90-91页 |
| ·质粒、细胞和试剂盒 | 第90页 |
| ·HIV-1单周期病毒粒子的获得及其p24相对浓度的测定 | 第90页 |
| ·单周期病毒粒了感染U373-MAGI-CCR5e细胞 | 第90-91页 |
| ·荧光素酶活性的测定 | 第91页 |
| ·X-gal染也 | 第91页 |
| ·结果 | 第91-96页 |
| ·cyclin T1蛋白的表达水平对HIV-1前病毒质粒复制的影响 | 第91-93页 |
| ·单周期HIV-1病毒粒了的获得及p24相对浓度的测定 | 第93-94页 |
| ·cyclin T1蛋白的表达水平对病毒感染早期的影响 | 第94-96页 |
| ·cyclin T1蛋白的表达水平对HIV-1 LTR活性的影响 | 第96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| 总讨论 | 第98-101页 |
| 参考文献 | 第101-118页 |
| 在读期间发表和待发表的论文 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
