| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| 1 活性氧类和病原菌毒素在寄主植物与病原菌互作中的作用 | 第13-19页 |
| ·ROS在寄主植物与病原菌互作中的作用 | 第13-16页 |
| ·植物中ROS的产生 | 第13-14页 |
| ·ROS在植物抗病过程中的作用 | 第14-15页 |
| ·植物中的ROS清除系统 | 第15-16页 |
| ·病原菌毒素在寄主植物与病原菌互作中的作用 | 第16-19页 |
| ·主要植物病原菌毒素 | 第17-18页 |
| ·病原菌毒素在病原菌致病过程中的作用 | 第18-19页 |
| 2 草酸氧化酶(OXO)和葡萄糖氧化酶(GO)及其转基因研究进展 | 第19-24页 |
| ·OXO(EC 1.2.3.4)及其转基因研究进展 | 第19-23页 |
| ·OXO可能是生物界最重要的草酸降解酶 | 第19-21页 |
| ·OXO的组成、结构及其酶学研究 | 第21-22页 |
| ·OXO在植物抗毒素基因工程中的应用 | 第22-23页 |
| ·GO(EC1.1.3.4)及其转基因研究进展 | 第23-24页 |
| ·GO的天然来源 | 第23页 |
| ·GO的组成、结构及其酶学研究 | 第23-24页 |
| ·GO在植物抗病基因工程中的应用 | 第24页 |
| 3 本研究的目的 | 第24-26页 |
| 第二章 GO基因和OXO基因在大肠杆菌中的表达 | 第26-37页 |
| 1 材料与方法 | 第26-33页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·本研究所构建的质粒 | 第26页 |
| ·LB培养基 | 第26-27页 |
| ·抗生素 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·DNA的限制性酶切 | 第28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第28页 |
| ·从凝胶中回收目的DNA | 第28-29页 |
| ·酶切载体与外源DNA的连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(化学法) | 第29-30页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌(化学法) | 第30页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第30页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-32页 |
| ·抗血清的制备 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-36页 |
| ·OXO基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-35页 |
| ·OXO基因原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·OXO基因的IPTG诱导表达 | 第34-35页 |
| ·GO保守区在大肠杆菌中的表达 | 第35-36页 |
| ·GO基因保守区段原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·GO基因保守区段的IPTG诱导表达 | 第35-36页 |
| ·抗GO血清的制备 | 第36页 |
| 3 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 GO基因和OXO基因在甘蓝型油菜中的转化 | 第37-53页 |
| 1 材料与方法 | 第37-44页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·植物受体 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·质粒 | 第37-38页 |
| ·本研究所构建的质粒 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·抗生素 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·植物表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·甘蓝型油菜的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·油菜基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·转基因油菜的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·转基因油菜的PCR-Southern印迹杂交检测 | 第42页 |
| ·转基因油菜的基因组Southern印迹杂交鉴定 | 第42-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-51页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44-47页 |
| ·OXO基因植物表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·OXO基因和GO基因双价表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·甘蓝型油菜的遗传转化 | 第47-48页 |
| ·Kan抗性苗的获得和转基因系后代的繁育 | 第47-48页 |
| ·转基因油菜的分子生物学鉴定 | 第48-51页 |
| ·转基因油菜的PCR检测 | 第48-49页 |
| ·转基因油菜的PCR-Southern杂交检测 | 第49-50页 |
| ·转基因油菜的基因组Southem印迹杂交鉴定 | 第50-51页 |
| ·转基因油菜中外源基因的遗传特性分析 | 第51页 |
| 3 小结 | 第51-53页 |
| 第四章 转基因油菜的表达分析及其菌核病抗性研究 | 第53-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌核 | 第53页 |
| ·PDA培养基 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-57页 |
| ·S.sclerotiorum的H_2O_2敏感性试验 | 第53-54页 |
| ·转基因油菜的OXO活性分析 | 第54-55页 |
| ·转GO基因油菜中GO的ELISA检测 | 第55-56页 |
| ·转基因油菜的GO活性分析 | 第56-57页 |
| ·转基因油菜的菌核病抗性鉴定 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·S.sclerotiorum的H_2O_2敏感性试验 | 第57-58页 |
| ·转OXO基因油菜的OXO酶活性分析 | 第58页 |
| ·转GO基因油菜中GO的ELISA检测 | 第58-59页 |
| ·转GO基因油菜的GO酶活性分析 | 第59-60页 |
| ·转GO基因油菜中GO酶含量与酶活性的相关性分析 | 第60-61页 |
| ·转基因油菜的菌核病抗性鉴定 | 第61-62页 |
| 3 小结 | 第62-64页 |
| 第五章 讨论 | 第64-66页 |
| 1 外源基因对转化效率的影响 | 第64页 |
| 2 整合T-DNA的序列不完整性 | 第64页 |
| 3 转基因油菜的抗氧化代谢能力 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
