| 第一部分 引言 | 第1-27页 |
| 一、 高通量筛选的一般概述 | 第10-17页 |
| (一) 高通量筛选技术的产生 | 第10页 |
| (二) 高通量筛选的原理 | 第10-11页 |
| (三) 高通量筛选的组成 | 第11-16页 |
| (四) 高通量筛选的一般过程 | 第16-17页 |
| 二、 关于G551D-CFTR激活剂的高通量筛选 | 第17-23页 |
| (一) CFTR氯离子通道的概况 | 第17-19页 |
| (二) CFTR突变的常见类型和突变的机理 | 第19-22页 |
| (三) G551D-CFTR的研究 | 第22-23页 |
| 三、 大肠杆菌甘油通道的研究综述 | 第23-25页 |
| 四、 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二部分 实验部分 | 第27-45页 |
| 一、 材料与方法 | 第27-34页 |
| (一) 小分子化合物库 | 第27页 |
| (二) 表达质粒的结构 | 第27页 |
| (三) 稳定共转染 | 第27-28页 |
| (四) Northern blot分析鉴定 | 第28页 |
| (五) 免疫细胞化学分析 | 第28页 |
| (六) 细胞模型功能鉴定 | 第28页 |
| (七) 毒性实验 | 第28-29页 |
| (八) 大肠杆菌基因组DNA提取 | 第29页 |
| (九) 大肠杆菌甘油通道GlpF表达质粒构建 | 第29-30页 |
| (十) 大肠杆菌GlpF甘油通道高通量筛选细胞模型建立 | 第30-32页 |
| (十一) Western blot检测GlpF蛋白质表达 | 第32-33页 |
| (十二) 大肠杆菌GlpF甘油通道功能分析方法 | 第33-34页 |
| 二、 结果与分析 | 第34-45页 |
| (一) G551D-CFTR激活剂高通量筛选细胞模型的研究结果 | 第34-40页 |
| 1 、 hG551D-CFTR真核细胞表达质粒与EYFP真核细胞表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2 、 G551D-CFTR激活剂的细胞模型的建立 | 第35-36页 |
| 3 、 G551D-CFTR氯离子通道荧光测定结果 | 第36页 |
| 4 、 高亲和力G551D-CFTR氯离子通道小分子激活剂的高通量筛选 | 第36-39页 |
| 5 、 G551D-CFTR_(BCO)活性的动力学分析结果 | 第39-40页 |
| (二) 大肠杆菌甘油通道GlpF调节剂高通量筛选细胞模型的建立 | 第40-45页 |
| 1 、 大肠杆菌基因组DNA的获得 | 第40页 |
| 2 、 大肠杆菌甘油通道(GlpF)基因的PCR产物 | 第40-41页 |
| 3 、 真核表达载体pcDNA3.1GlpF-MycHis的构建 | 第41-42页 |
| 4 、 重组体中大肠杆菌GlpF序列分析结果 | 第42页 |
| 5 、 大肠杆菌甘油通道GlpF稳定转染细胞系免疫细胞化学鉴定结果 | 第42-43页 |
| 6 、 大肠杆菌甘油通道GlpF稳定转染细胞系免疫印迹鉴定结果 | 第43-44页 |
| 7 、 大肠杆菌GlpF甘油通道功能分析结果 | 第44-45页 |
| 第三部分 讨论 | 第45-48页 |
| 一、 G551D-CFTR_(BCO)作为G551D-CFTR激活剂用于囊性纤维化的治疗药物的可能性及存在的主要问题 | 第45页 |
| 二、 在哺乳类动物细胞中表达大肠杆菌甘油通道的理论意义 | 第45-46页 |
| 三、 寻找大肠杆菌甘油通道抑制剂的意义及CHO／GlpF-MycHis作为大肠杆菌甘油通道抑制剂高通量筛选模型的可能性 | 第46-48页 |
| 第四部分 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60页 |
