| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-38页 |
| ·植酸酶及其基因工程研究进展 | 第14-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第25-37页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 2 实验材料与方法 | 第38-59页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基及有关溶液配制 | 第39-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-59页 |
| ·A. niger N-2植酸酶phyA基因的扩增、克隆及序列测定 | 第41-44页 |
| ·A. niger N-2基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·植酸酶phyA基因的PCR扩增 | 第43页 |
| ·植酸酶phyA基因PCR产物的克隆及序列测定 | 第43-44页 |
| ·植酸酶phyA 基因重组酵母分泌型表达载体的构建和鉴定 | 第44-46页 |
| ·植酸酶 phyA 基因重组酵母表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·pPIC9K/phyA 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第46页 |
| ·重组pPIC9K/phyA 质粒电击转化Pichia pastoris及酵母转化子的筛选 | 第46-52页 |
| ·线性化质粒 DNA 制备 | 第46-48页 |
| ·Pichia pastoris GS115 感受态细胞的制备(电击法) | 第48页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K/phyA电击转化酵母感受态细胞 | 第48-49页 |
| ·酵母转化子的筛选与鉴定 | 第49-52页 |
| ·A. niger N-2植酸酶phyA 基因在Pichia pastoris中的高效表达与表达产物的检测 | 第52-59页 |
| ·酵母工程菌的培养和植酸酶的诱导分泌表达 | 第52-53页 |
| ·植酸酶 phyA 基因表达产物的检测和高表达酵母菌株的筛选 | 第53-57页 |
| ·表达植酸酶的酶学性质研究 | 第57-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-78页 |
| ·A. niger N-2植酸酶phyA基因的PCR扩增、克隆及序列测定 | 第59-63页 |
| ·A. niger N-2 基因组 DNA 提取 | 第59页 |
| ·植酸酶 phyA 基因的 PCR 扩增 | 第59-60页 |
| ·植酸酶 phyA 基因扩增产物的克隆和重组质粒的酶切鉴定 | 第60-61页 |
| ·A. niger N-2 植酸酶 phyA 基因序列测定与分析 | 第61-63页 |
| ·植酸酶 phyA 基因分泌型重组酵母表达载体的构建和鉴定 | 第63-67页 |
| ·pPIC9K/phyA重组酵母表达质粒电击转化Pichia pastoris及酵母转化子的筛选 | 第67-70页 |
| ·酵母转化子的甲醇利用表型筛选 | 第67页 |
| ·酵母转化子的PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·phyA 基因多拷贝整合子筛选 | 第68-70页 |
| ·A. niger N-2植酸酶phyA 基因在 Pichia pastoris 中的高效表达与表达产物的检测 | 第70-78页 |
| ·植酸酶phyA基因在Pichia pastoris中的诱导表达与高表达酵母菌株的筛选 | 第70页 |
| ·植酸酶酵母工程菌产酶曲线的测定 | 第70-71页 |
| ·phyA 基因表达产物的 SDS-PAGE 检测 | 第71-72页 |
| ·植酸酶酵母工程菌的遗传稳定性分析 | 第72页 |
| ·表达植酸酶 PHYA 的酶学性质研究 | 第72-78页 |
| ·表达植酸酶PHYA的最适反应pH值测定 | 第72-73页 |
| ·表达植酸酶PHYA的pH稳定性测定 | 第73-74页 |
| ·表达植酸酶 PHYA 的最适反应温度测定 | 第74-75页 |
| ·表达植酸酶 PHYA 的热稳定性测定 | 第75-76页 |
| ·金属离子对表达植酸酶 PHYA 活性的影响测定 | 第76-77页 |
| ·表达植酸酶 PHYA 的比活性测定 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-84页 |
| ·利用 Pichia pastoris 表达系统高效表达重组植酸酶 | 第78-79页 |
| ·影响外源基因在 Pichia pastoris 中高效表达的主要因素 | 第79-81页 |
| ·实现外源蛋白在 Pichia pastoris 表达系统中高效表达的策略 | 第81-82页 |
| ·表达植酸酶 PHYA 的酶学性质 | 第82-84页 |
| 5 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读硕士研究生期间发表论文 | 第98页 |
