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SIRP α及Gankyrin在神经发育和分化中的表达调控和作用研究

缩略词表第1-6页
中文摘要第6-8页
英文摘要(ABSTRACT)第8-10页
第一部分 SIRPα在小鼠神经发育过程中的表达第10-40页
 前言第10-12页
 试剂与仪器第12-15页
  1 材料第12页
  2 主要化学药品和试剂第12-14页
  3 主要实验仪器第14-15页
 实验方法第15-28页
  1 小鼠胚胎模型建立第15页
  2 取材和切片第15-16页
  3 感受态细胞制备第16页
  4 质粒转化第16页
  5 质粒小量抽提第16页
  6 质粒大量抽提第16-17页
  7 GST-SIRPα跑内区片段融合蛋白质体外表达和纯化第17-18页
  8 兔抗人SIRPα胞内区抗体的制备、纯化和鉴定第18-21页
  9 抗SIRPα跑内区抗体对小鼠脑组织切片行免疫组织化学染色第21-22页
  10 组织总蛋白提取和浓度测定第22-23页
  11 Western Blot第23页
  12 SIRPα引物设计第23页
  13 SIRPα胞内区序列正义和反义RNA探针合成第23-26页
  14 原位杂交检测SIRPα表达第26-28页
 实验结果第28-36页
  1 兔抗SIRPα抗体的制备、纯化与鉴定第28-29页
  2 SIRPα原位杂交探针制备第29-31页
  3 SIRPαmRNA在小鼠脑组织中的表达定位第31-33页
  4 SIRPα蛋白在脑组织中的定位第33-34页
  5 SIRPα在脑发育过程中的表达改变第34-36页
 讨论第36-38页
 文献第38-40页
第二部分 SIRPα在PC12神经分化过程中的作用研究第40-69页
 前言第40-41页
 试剂和仪器第41-44页
  1 材料第41-42页
  2 主要试剂配置第42-43页
  3 主要仪器第43-44页
 实验方法第44-50页
  1 PC12细胞培养第44页
  2 建立SIRPαWT基因稳定转染PC12细胞系第44-47页
  3 细胞增殖实验第47-48页
  4 NGF诱导PC12细胞神经分化分析第48页
  5 荧光素酶报告基因分析第48页
  6 免疫沉淀第48-49页
  7 细胞免疫荧光染色第49-50页
 实验结果第50-60页
  1 SIRPα在NGF诱导PC12细胞神经分化后的表达第50-51页
  2 稳定表达野生型SIRPαPC12细胞系的建立和鉴定第51-52页
  3 稳定转染SIRPαPC12细胞增殖能力检测第52-54页
  4 SIRPα对NGF刺激PC12细胞神经分化反应的影响第54页
  5 SIRPα胞内区缺失突变体对NGF刺激的PC12神经分化的影响第54-57页
  6 SIRPα表达对PC12细胞中NF-κB活化的影响第57-58页
  7 SIRPα对PC12细胞中MAPK通路活化的影响第58-59页
  8 SIRPα对NGF诱导PC12细胞神经分化过程中ankyrin重复结构域蛋白第59-60页
   Gankyrin蛋白表达的调节第59-60页
 讨论第60-66页
  1 NGF刺激PC12细胞神经分化后SIRPα表达上调的意义第60-62页
  2 SIRPα对NGF诱导PC12细胞形态分化过程的抑制及其意义第62-64页
  3 SIRPα对NGF诱导PC12细胞形态分化抑制的机制第64-65页
  4 SIRPα对PC12细胞中NF-κB活性的调节第65页
  5 SIRPα对NGF诱导不同信号传导通路的不同效应第65-66页
  6 SIRPα对NGF诱导神经分化过程中Gankyrin表达上调的促进第66页
 文献第66-69页
第三部分 Gankyrin在NGF诱导PC12神经分化过程中的表达调控研究第69-83页
 前言第69-70页
 试剂与仪器第70-71页
  1 材料第70-71页
  2 主要化学药品和试剂第71页
  3 主要实验仪器(同第二部分)第71页
 实验方法第71-74页
  1 小鼠胚眙模型建立、取材和免疫组化石蜡包埋切片(同第一部分)第71页
  2 组织总蛋白提取和浓度测定(同第一部分)第71页
  3 抗Gankyrin抗体对小鼠脑组织切片行免疫组织化学染色第71-72页
  4 NGF刺激PC12细胞及MAPK激酶抑制剂处理第72-74页
  5 Western Blot分析(同第一和第二部分)第74页
 实验结果第74-79页
  1 Gankyrin在小鼠脑发育过程中的表达改变第74-75页
  2 Gankyrin在脑组织中表达定位第75-76页
  3 Gankyrin在神经发育过程中表达调控机制第76-79页
 讨论第79-81页
 文献第81-83页
[综述一]第83-95页
 信号调节蛋白研究进展第83-95页
[综述二]第95-112页
 Current understanding of the signal transduction in HCC第95-112页
致谢第112页

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