| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| ·Bt及其杀虫蛋白基因的分类 | 第10-11页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机理 | 第12-14页 |
| ·杀虫晶体蛋白的溶解和酶解 | 第13页 |
| ·活性毒素与特异性受体的识别结合 | 第13页 |
| ·昆虫消化道细胞的穿孔及细胞裂解 | 第13-14页 |
| ·转Bt基因抗虫植物研究 | 第14-17页 |
| ·植物抗虫基因工程中存在的主要问题及其对策 | 第17-21页 |
| ·Bt杀虫蛋白基因及其毒蛋白的表达水平 | 第17-18页 |
| ·信号肽的结构与功能 | 第17页 |
| ·ER滞留信号 | 第17-18页 |
| ·靶标昆虫对抗虫转基因植物产生耐受性及抗性管理对策 | 第18-19页 |
| ·转基因沉默 | 第19页 |
| ·转Bt基因植物的生物安全性 | 第19-21页 |
| ·转基因植物的食品安全性 | 第20-21页 |
| ·转基因植物的环境安全性 | 第21页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-30页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·水稻受体材料 | 第22页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·质粒和载体 | 第22页 |
| ·重要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·重要生化试剂 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第23页 |
| ·目的片段的回收 | 第23-24页 |
| ·冻融法 | 第23页 |
| ·用Sangon的UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回收目的片段 | 第23-24页 |
| ·重组前预处理 | 第24页 |
| ·酶切 | 第24页 |
| ·Klenow Fragment补平 | 第24页 |
| ·去磷酸化处理(CIAP) | 第24页 |
| ·连接 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌质粒热激转化 | 第25页 |
| ·重组子简易筛选 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第25页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第25-26页 |
| ·农杆菌电激转化 | 第26页 |
| ·农杆菌质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导转化籼稻明恢86 | 第27-28页 |
| ·受体材料的处理 | 第27页 |
| ·农杆菌的培养 | 第27页 |
| ·共培养 | 第27页 |
| ·洗菌 | 第27页 |
| ·抗性愈伤组织筛选 | 第27页 |
| ·抗性愈伤分化及长根 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·PCR检测转基因水稻植株和鉴定重组质粒 | 第28页 |
| ·CTAB法提取水稻叶片DNA | 第28页 |
| ·PCR检测 | 第28页 |
| ·双抗夹心法测转基因水稻中研表达量 | 第28-29页 |
| ·考马斯亮蓝(G-250)法测定蛋白浓度 | 第29页 |
| ·数据处理 | 第29页 |
| ·转基因水稻自交后代潮霉素抗性筛选 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-48页 |
| ·设计与合成 | 第30-37页 |
| ·基因设计模板的比较、选择及分析 | 第30页 |
| ·FMcry11 Bal基因的设计 | 第30-34页 |
| ·密码子的优化及G+C含量的提高 | 第32-33页 |
| ·消除野生型cry11 Bal基因中不利于在植物中表达的序列 | 第33-34页 |
| ·优化FMcry11 Bal基因DNA序列中常见的限制性内切酶酶切位点 | 第34页 |
| ·对FMcry11 Bal基因的5′ UTR和3′ UTR序列进行适当的修饰 | 第34页 |
| ·在FMcry11 Bal基因尾部加上两个串联的终止子序列 | 第34页 |
| ·全人工合成SCH基因 | 第34-37页 |
| ·人工合成SCH杀虫基因单子叶植物表达载体的构建 | 第37-45页 |
| ·农杆菌介导转化籼稻明恢86 | 第45页 |
| ·转基因水稻的检测 | 第45-47页 |
| ·转基因水稻的PCR检测 | 第45页 |
| ·转基因水稻的ELISA检测 | 第45-47页 |
| ·转基因水稻T_0代种子的遗传分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·Bt杀虫基因的人工修饰与改造 | 第48-49页 |
| ·对FMcry11 Bal基因的非翻译区进行适当修饰，增强基因在转基因植物中的表达 | 第49页 |
| ·MAR序列介导促进与增强转基因表达 | 第49-50页 |
| ·双T-DNA共转化去除选择标记基因 | 第50页 |
| ·转SCH基因水稻T_0代种子标记基因的遗传分离 | 第50-51页 |
| 5 主要结论与展望 | 第51-52页 |
| ·主要结论 | 第51页 |
| ·后继研究展望 | 第51-52页 |
| 6 参考文献 | 第52-57页 |
| 7 附录与图版 | 第57-84页 |
| ·改造后的FMcry11 Bal基因序列与原始基因cry11 Bal序列比较 | 第57-59页 |
| ·农杆菌介导转化水稻胚性愈伤获得完整植株 | 第59页 |
| ·利用共转化系统去除选择标记基因流程图 | 第59-60页 |
| ·对双翅目具有杀虫活性的Bt杀虫蛋白基因比较 | 第60-67页 |
| ·FMcry11 Bal基因的5′ UTR和3′ UTR序列的修饰 | 第67-68页 |
| ·限制性内切酶位点统计表 | 第68-69页 |
| ·基因合成示意图及其引物组成 | 第69-76页 |
| ·抗生素和培养基 | 第76-79页 |
| ·抗生素及工作浓度 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76-79页 |
| ·SCH基因测序图 | 第79-84页 |
| 8 本文缩写词 | 第84-85页 |
| 9 致谢 | 第85页 |
