| 缩写表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-31页 |
| 植物磷脂酶C信号途径 | 第12-31页 |
| 1 肌醇磷脂信使系统 | 第12-15页 |
| ·肌醇磷脂系统的组分—磷脂分子及激酶 | 第12-13页 |
| ·肌醇磷脂系统的组分—磷脂酶 | 第13-15页 |
| 2 磷脂酶C | 第15-29页 |
| ·动物磷脂酶C结构及反应机制 | 第15-18页 |
| ·磷脂酶C的结构 | 第15-17页 |
| ·磷脂酶C的调节机制 | 第17-18页 |
| ·植物磷脂酶C | 第18-29页 |
| ·植物磷脂酶C的类型 | 第18-19页 |
| ·植物磷脂酶C的基因克隆.结构特征及其生化特性 | 第19-23页 |
| ·植物磷脂酶C的生理功能 | 第23-27页 |
| ·植物磷脂酶C途径的调控机制 | 第27-29页 |
| 3 问题与展望 | 第29-31页 |
| 第二部分 研究论文 | 第31-99页 |
| 前言 | 第31-33页 |
| 第一节 百合花粉PLC活性的检测及其对[Ca~(2+)]_(cyt)的影响 | 第33-46页 |
| 材料和方法 | 第33-36页 |
| 1 材料和试剂 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-36页 |
| ·花粉原生质体制备及纯化 | 第33-34页 |
| ·[~3H]-PIP_2脂类分子团贮藏液制备 | 第34页 |
| ·磷脂酶C活性测定 | 第34页 |
| ·百合花粉粒细胞钙离子荧光指示剂fluo-3AM的低温装载 | 第34-35页 |
| ·百合花粉细胞质中游离钙离子浓度的测定 | 第35-36页 |
| 结果与分析 | 第36-46页 |
| 1 百合花粉细胞中磷脂酶C活性的检测 | 第36页 |
| 2 细胞外CaM对磷脂酶C活性的影响 | 第36-38页 |
| 3 异三聚体G蛋白对磷脂酶C活性的影响 | 第38-40页 |
| 4 细胞外CaM与异三聚体G蛋白在调节磷脂酶C活性中的关系 | 第40-41页 |
| 5 PLC抑制剂U-73122以及外源CaM对花粉内钙离子浓度的影响 | 第41-46页 |
| 第二节 百合花粉磷脂酶C的cDNA克隆及分析 | 第46-74页 |
| 材料和方法 | 第46-56页 |
| 1 实验材料 | 第46页 |
| 2 试剂 | 第46-47页 |
| 3 实验方法 | 第47-56页 |
| ·花粉萌发 | 第47页 |
| ·百合萌发花粉总RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第47页 |
| ·磷脂酶C cDNA的克隆 | 第47-50页 |
| ·PLCcDNA转录水平的检测 | 第50-53页 |
| ·酵母双杂交检测异三聚体G蛋白与PLC的相互作用 | 第53-56页 |
| 结果与分析 | 第56-74页 |
| 1 百合萌发花粉总RNA的提取及检测 | 第56页 |
| 2 PLC保守域片段的获得 | 第56-59页 |
| 3 3'RACE.5'RACE及全长磷脂酶C基因的获得 | 第59-69页 |
| ·RACE及5'RACE | 第59页 |
| ·百合花粉磷脂酶C cDNA全长的获得 | 第59-65页 |
| ·LdPLC1和LdPLC2蛋白同源性的比较及系统分析 | 第65-69页 |
| 4 LdPLC与花粉萌发的关系 | 第69-70页 |
| 5 LdPLC与G蛋白的相互作用 | 第70-74页 |
| ·酵母双杂交载体的构建及酵母菌的遗传转化 | 第70-72页 |
| ·四缺平板上的生长及X-gal染色 | 第72-74页 |
| 第三节 拟南芥磷脂酶C参与花粉萌发和生长的调节 | 第74-91页 |
| 材料与方法 | 第74-79页 |
| 1 菌株.试剂和酶 | 第74页 |
| 2 植物材料 | 第74页 |
| 3 拟南芥T-DNA插入PLC基因突变体的鉴定 | 第74-76页 |
| ·拟南芥的种植： | 第74-75页 |
| ·植物基因组DNA小量提取： | 第75页 |
| ·突变体的PCR及RT-PCR鉴定： | 第75-76页 |
| 4 拟南芥的遗传转化 | 第76-78页 |
| ·双元载体的构建 | 第76页 |
| ·农杆菌的转化 | 第76-77页 |
| ·拟南芥的农杆菌真空渗入法遗传转化 | 第77-78页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第78页 |
| 5 拟南芥花粉萌发及花粉管生长速率测定 | 第78-79页 |
| 结果与分析 | 第79-91页 |
| 1 拟南芥T-DNA插入PLC基因突变体的鉴定 | 第79-81页 |
| 2 PLC基因缺失纯合体与野生型的形态比较 | 第81-82页 |
| 3 拟南芥遗传转化PLC基因超表达体的获得及鉴定 | 第82-84页 |
| ·二元载体的构建.转化及拟南芥的遗传转化 | 第82-83页 |
| ·转基因拟南芥的筛选和鉴定 | 第83-84页 |
| 4 PLC参与花粉萌发及花粉管伸长生长的调控过程 | 第84-88页 |
| 5 拟南芥PLC亚型之间结构和表达水平的比较 | 第88-91页 |
| 第四节 讨论 | 第91-99页 |
| 1 PLC-IP_3信使系统介导细胞外钙调素跨膜信号转导 | 第91-94页 |
| 2 百合花粉中磷脂酶CcDNA的克隆及分析 | 第94-96页 |
| 3 PLC与花粉萌发和生长的调节 | 第96-99页 |
| 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 个人简历 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
