| 目 录 | 第1-5页 |
| 论文摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 综 述 部 分 | 第8-28页 |
| 第一部分 ANNEXIN V 的结构与功能 | 第8-16页 |
| 一. Annexin V的结构 | 第8-10页 |
| 二. Annexin V的生物功能 | 第10-12页 |
| 参考文献 | 第12-16页 |
| 第二部分 昆虫细胞表达系统 | 第16-28页 |
| 一. 杆状病毒/昆虫细胞表达系统的特点 | 第16-17页 |
| 二. 杆状病毒 | 第17页 |
| 三. Bac-to-Bac昆虫细胞表达系统 | 第17-19页 |
| 四. 杆状病毒/昆虫细胞表达系统中后加工功能的优化 | 第19-21页 |
| 五. 信号肽在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的应用 | 第21-24页 |
| 参考文献 | 第24-28页 |
| 实 验 部 分 | 第28-69页 |
| 第一章 材料和方法 | 第28-36页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| ·菌种、质粒和细胞株 | 第28页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要溶液 | 第29-30页 |
| 2 主要方法 | 第30-36页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·昆虫细胞培养 | 第31-32页 |
| ·昆虫细胞的冻存和复苏 | 第32-33页 |
| ·Cellfectin 共转染 | 第33页 |
| ·Western blot | 第33-34页 |
| ·纤溶平板实验 | 第34页 |
| ·Annexin V膜结合实验 | 第34-36页 |
| 第二章 信号肽EGT和MEL的合成与新载体构建 | 第36-44页 |
| 1 前言 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| ·合成mel和egt的部分序列 | 第37页 |
| ·PCR延伸法合成信号肽egt和mel全序列 | 第37-38页 |
| ·胶回收egt和mel的PCR产物 | 第38页 |
| ·构建质粒pSK egt和pSK mel | 第38-39页 |
| ·构建质粒pHT egt和pHT mel | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三章 UKAV在昆虫细胞中的表达及其功能 | 第44-62页 |
| 1 前言 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| ·质粒pHT UKAV、pHT mel－UKAV和pHT egt-UKAV的构建 | 第45页 |
| ·重组Bacmid病毒的构建 | 第45-47页 |
| ·重组Bacmid病毒的鉴定 | 第47页 |
| ·Cellfectin共转染 | 第47页 |
| ·UKAV在Tn细胞(BTI-TN-5B1-4)中的表达 | 第47-48页 |
| ·UKAV在Sf9细胞中的表达 | 第48页 |
| ·纤溶平板法测定UKAV的纤溶活性 | 第48页 |
| ·Western Blot检测UKAV的表达 | 第48页 |
| ·膜结合实验测定UKAV中Annexin V的活性 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-59页 |
| ·重组供体质粒pHT UKAV、pHT mel-UKAV和pHT egt-UKAV构建 | 第49-50页 |
| ·重组Bac UKAV、Bac mel-UKAV和Bac egt-UKAV及其病毒的获得 | 第50-51页 |
| ·UKAV在Tn细胞中的表达 | 第51-53页 |
| ·UKAV在Sf9细胞中的表达 | 第53-55页 |
| ·比较Bac UKAV、Bac mel-UKAV和Bac egt-UKAV在Sf9细胞中的表达 | 第55-57页 |
| ·重组蛋白UKAV的膜结合活性 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第四章 重组蛋白UKAV在原核细胞中的表达 | 第62-69页 |
| 1 方法 | 第62-65页 |
| ·原核细胞表达质粒pET32 UKAV的构建 | 第62页 |
| ·原核细胞表达质粒pMAL UKAV的构建 | 第62页 |
| ·原核细胞表达质粒pT7473 UKAV的构建 | 第62-63页 |
| ·表达质粒pMAL UKAV在BL21(DE3)和HMS174(DE3)中的表达 | 第63页 |
| ·表达质粒pET32 UKAV和pT7473 UKAV在HMS174(DE3)中的表达 | 第63页 |
| ·重组蛋白UKAV的纯化 | 第63-65页 |
| 2 结果 | 第65-69页 |
| ·表达质粒pMAL UKAV、pET32 UKAV和pT7473 UKAV的示意图 | 第65-66页 |
| ·表达质粒pMAL UKAV在BL21(DE3)和HMS174(DE3)中的表达 | 第66页 |
| ·表达质粒pET32 UKAV和pT7473 UKAV在HMS174(DE3)中的表达 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白UKAV的纯化 | 第67-69页 |
| 小 结 | 第69-70页 |
| 致 谢 | 第70-71页 |
| 发表和待发表的论文 | 第71页 |
