中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一部分 文献综述 | 第10-22页 |
1. 淀粉生物合成的研究概况 | 第10-13页 |
1.1 淀粉生物合成的场所和途径 | 第10页 |
1.2 参与淀粉生物合成的酶 | 第10-11页 |
1.3 ADP葡糖糖焦磷酸化酶及其基因的研究进展 | 第11-13页 |
2. 植物反义RNA研究进展 | 第13-15页 |
2.1 反义RNA的发现 | 第13页 |
2.2 反义RNA的作用机理 | 第13页 |
2.3 植物反义RNA技术的应用 | 第13-15页 |
2.4 反义RNA技术展望 | 第15页 |
3. 基因枪法和农杆菌介导的遗传转化研究进展 | 第15-21页 |
3.1 基因枪法介导的植物遗传转化研究进展 | 第16-18页 |
3.1.1 基因枪法的提出 | 第16页 |
3.1.2 基因枪法的转化机理 | 第16页 |
3.1.3 影响因素探讨 | 第16-18页 |
3.1.4 基因枪转化技术展望 | 第18页 |
3.2 杆曲介导的遗传转化研究进展 | 第18-21页 |
3.2.1 转化机理 | 第18-19页 |
3.2.2 农杆菌介导的基因转移方法 | 第19页 |
3.2.3 影响农杆菌转化效率的因素 | 第19-21页 |
引言 | 第21-22页 |
第二部分 AGPS1反义表达载体的构建 | 第22-30页 |
1. 材料与方法 | 第22-26页 |
1.1 材料 | 第22页 |
1.2 实验方法 | 第22-26页 |
1.2.1 大肠杆菌质粒DNA的提取,感受态的制备及转化 | 第22-23页 |
1.2.2 质粒DNA酶切,目的片段的回收及连接 | 第23页 |
1.2.3 农杆菌感受态细胞的制备,转化及质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
1.2.4 PCR扩增 | 第24-26页 |
2. 结果与分析 | 第26-28页 |
2.1 表达载体pBIN—AGPS1的构建及转化 | 第26页 |
2.2 表达载体pPAT—AGPS1的构建及转化 | 第26-28页 |
3. 讨论 | 第28-30页 |
第三部 AGPS1反义基因对魔芋的遗传转化 | 第30-45页 |
1. 农杆菌介导的魔芋遗传转化 | 第30-39页 |
1.1 材料与方法 | 第30-34页 |
1.1.1 材料 | 第30页 |
1.1.2 方法 | 第30-34页 |
1.1.2.1 无菌材料的获得 | 第30-31页 |
1.1.2.2 农杆菌的培养与活化 | 第31页 |
1.1.2.3 Kan选择压确定 | 第31页 |
1.1.2.4 抑菌剂浓度对芽分化的影响 | 第31页 |
1.1.2.5 转化方法 | 第31页 |
1.1.2.6 抗性植株的PCR检测 | 第31-33页 |
1.1.2.7 转化植株的PCR-Southern检测 | 第33-34页 |
1.2 结果与分析 | 第34-38页 |
1.2.1 转化系统 | 第34-36页 |
1.2.1.1 Kan筛选压的确定: | 第34-35页 |
1.2.1.2 抑菌剂(carb)浓度对魔芋愈伤芽分化的影响 | 第35页 |
1.2.1.3 预养时间对转化的影响 | 第35-36页 |
1.2.2 转化子的初步筛选结果 | 第36页 |
1.2.3 抗性植株的PCR检测 | 第36-38页 |
1.2.4 转基因植株的PCR—Southern检测 | 第38页 |
1.3 讨论 | 第38-39页 |
1.3.1 影响农杆菌转化魔芋的因素 | 第38页 |
1.3.2 魔芋基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
1.3.3 抗性植株的PCR和PCR—Southern检测 | 第39页 |
2. 基因枪法介导的魔芋遗传转化 | 第39-45页 |
2.1 材料与方法 | 第39-41页 |
2.1.1 材料 | 第39页 |
2.1.2 实验方法 | 第39-41页 |
2.1.2.1 微弹的制备 | 第39-40页 |
2.1.2.2 基因枪轰击 | 第40页 |
2.1.2.3 轰击前后材料的处理 | 第40页 |
2.1.2.4 轰击后转化子的筛选 | 第40页 |
2.1.2.5 受体材料对Basta的敏感性实验 | 第40页 |
2.1.2.6 最适的氦气压力及轰击距离 | 第40页 |
2.1.2.7 抗性芽的PCR检测 | 第40-41页 |
2.1.2.8 抗性芽的pat基因检测 | 第41页 |
2.2 结果与分析 | 第41-44页 |
2.2.1 Basta对魔芋愈伤分化的影响 | 第41-42页 |
2.2.2 轰击的氦气压力及轰击距离对转化的影响 | 第42页 |
2.2.3 转化体的筛选和抗性植株的获得 | 第42-43页 |
2.2.4 抗性芽的PCR检测 | 第43-44页 |
2.2.4.1 抗性芽的AGPS1反义基因的PCR检测 | 第43页 |
2.2.4.2 抗性芽的Pat基因检测 | 第43-44页 |
2.3 讨论 | 第44-45页 |
结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-51页 |
缩写词 | 第51-52页 |
发表论文 | 第52-53页 |
致谢 | 第53页 |