糖尿病基因治疗的实验研究--人胰岛素基因真核表达质粒的构建、表达和降血糖作用
| 缩写 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 实验材料 | 第14-18页 |
| 一、细菌菌株 | 第14页 |
| 二、细胞株 | 第14页 |
| 三、载体 | 第14页 |
| 四、酶类 | 第14页 |
| 五、细胞培养及试剂 | 第14-15页 |
| 六、主要生化试剂 | 第15页 |
| 七、动物 | 第15页 |
| 八、主要仪器设备 | 第15-18页 |
| 实验方法 | 第18-26页 |
| 一、本研究的技术路线 | 第18页 |
| 二、人胰岛素原基因真核细胞表达载体的构建 | 第18-22页 |
| 1.质粒DNA的碱法小量制备 | 第18-19页 |
| 2.质粒DNA的大量制备 | 第19页 |
| 3.质粒的纯化 | 第19-20页 |
| 4.从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第20-21页 |
| 5.克隆筛选 | 第21页 |
| 6.感受态细菌的制备 | 第21-22页 |
| 7.质粒DNA的转化 | 第22页 |
| 8.DNA片段的连接 | 第22页 |
| 9.质粒DNA的双链测序 | 第22页 |
| 三、人胰岛素表达细胞株的建立 | 第22-24页 |
| 1.细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.细胞转染 | 第23页 |
| 3.阳性细胞克隆的扩增 | 第23-24页 |
| 4.表达蛋白产物的测定 | 第24页 |
| 四、人胰岛素表达细胞株的体内实验 | 第24-26页 |
| 1.糖尿病动物模型的制备 | 第24-25页 |
| 2.接种细胞的准备 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-43页 |
| 一、重组质粒的酶切电泳图谱分析及核苷酸序列测定 | 第26-31页 |
| 二、人胰岛素基因真核表达质粒的转染及活性检测 | 第31-35页 |
| 三、人胰岛素表达细胞株的体内实验 | 第35-43页 |
| 讨论 | 第43-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 综述(Ⅰ) | 第54-70页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 综述(Ⅱ) | 第70-82页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 个人简历 | 第82-83页 |
| 发表文章 | 第83-84页 |
