稳定表达T7 RNA聚合酶的ST细胞系的建立
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-13页 |
| 1 猪瘟和猪瘟病毒概述 | 第7页 |
| 2 猪瘟病毒及基因组结构 | 第7-9页 |
| 3 猪瘟病毒的增殖及细胞培养 | 第9-13页 |
| 第二章 RNA病毒的反向遗传操作技术进展 | 第13-28页 |
| 1 RNA病毒的反向遗传系统构建的理论基础 | 第13-17页 |
| ·正链RNA病毒的反向遗传学操作 | 第14-16页 |
| ·负链病毒的反向遗传学操作 | 第16-17页 |
| 2 应用于病毒反向遗传学中的转录系统 | 第17-20页 |
| ·原核转录 | 第17-19页 |
| ·真核转录系统 | 第19-20页 |
| 3 病毒拯救体系的研究进展 | 第20-23页 |
| ·真核聚合酶Ⅰ拯救系统 | 第20-21页 |
| ·真核聚合酶Ⅱ拯救系统 | 第21页 |
| ·以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救体系 | 第21-23页 |
| 4 病毒拯救体系应用的研究进展 | 第23-25页 |
| ·揭示病毒的分子特征 | 第23-24页 |
| ·研究新型疫苗 | 第24页 |
| ·开发新的基因工程载体 | 第24-25页 |
| ·代替实验动物模型 | 第25页 |
| 5 反向遗传技术在猪瘟中的应用 | 第25-28页 |
| 第三章 实验研究 | 第28-44页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第28页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| ·细胞的瞬时转染 | 第31-32页 |
| ·PCR检测T7 RNA聚合酶表达情况 | 第32页 |
| ·G148加压筛选浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的转染及细胞系的建立 | 第33-34页 |
| ·稳定表达T7 RNA聚合酶细胞系的鉴定 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-41页 |
| ·目的片段的获得 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的获得及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·ST细胞的瞬时转染 | 第37-38页 |
| ·G418加压筛选浓度的确定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的转染及细胞系的建立 | 第39页 |
| ·阳性培养孔的亚克隆筛选及纯化 | 第39-40页 |
| ·稳定表达T7 RNA聚合酶基因纯细胞系的鉴定 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| ·RNA病毒反向遗传操作系统的重要性 | 第41-42页 |
| ·病毒拯救体系的优化 | 第42页 |
| ·ST/T7细胞系建立的重要性 | 第42-44页 |
| 第四章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |
