重组表达过氧化氢酶及抗氧化损伤生物活性的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 1.研究背景 | 第14-17页 |
| 2.研究目的及主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第一章 人源过氧化氢酶的重组表达 | 第18-55页 |
| 1.材料试剂溶液 | 第19-22页 |
| 2.实验方法 | 第22-28页 |
| 3.结果和讨论 | 第28-53页 |
| ·人源过氧化氢酶基因的获得 | 第28-29页 |
| ·T-A克隆及测序 | 第29-33页 |
| ·pPIC9K-CAT重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·重组酵母菌株的筛选及鉴定 | 第35-38页 |
| ·重组菌摇瓶发酵条件优化 | 第38-49页 |
| ·发酵罐发酵 | 第49-50页 |
| ·重组过氧化氢酶的分离纯化 | 第50-53页 |
| 4 小结 | 第53-55页 |
| 第二章 过氧化氢酶的原核表达 | 第55-83页 |
| 1.实验材料 | 第56-58页 |
| 2 实验方法 | 第58-64页 |
| 3 结果和讨论 | 第64-82页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第64-65页 |
| ·目的基因的亚克隆 | 第65页 |
| ·目的基因的测序鉴定 | 第65-68页 |
| ·表达质粒的构建及鉴定 | 第68-70页 |
| ·重组质粒的电转化及重组菌中质粒稳定性的考察 | 第70-71页 |
| ·重组菌分泌鉴定 | 第71-73页 |
| ·发酵条件的优化 | 第73-75页 |
| ·重组过氧化氢酶的分离纯化 | 第75-79页 |
| ·重组过氧化氢酶的性质研究 | 第79-82页 |
| 4 小结 | 第82-83页 |
| 第三章 过氧化氢酶的抗氧化抗损伤作用 | 第83-98页 |
| 1.实验材料和方法 | 第84-88页 |
| 2.结果和讨论 | 第88-98页 |
| ·肺部给药的有效性 | 第88页 |
| ·过氧化氢酶抗急性氧化损伤 | 第88-93页 |
| ·小鼠外观,饮食量及体重变化 | 第88-89页 |
| ·肺病变情况比较 | 第89-91页 |
| ·生命保护作用 | 第91-92页 |
| ·抗急性肺氧化损伤实验小结及讨论 | 第92-93页 |
| ·PEG-过氧化氢酶抗D-半乳糖诱导的亚急性衰老 | 第93-98页 |
| ·各脏器组织总抗氧化能力T-AOC含量分析 | 第93-94页 |
| ·各脏器组织超氧化歧化酶SOD含量分析 | 第94-95页 |
| ·各脏器组织丙二醛MDA含量分析 | 第95-96页 |
| ·抗亚急性衰老实验讨论 | 第96-98页 |
| 第四章 微球化过氧化氢酶的研究 | 第98-109页 |
| 1.实验材料和方法 | 第99-101页 |
| 2.结果和讨论 | 第101-106页 |
| ·微球载样量测定 | 第101页 |
| ·过氧化氢酶微球形态观察 | 第101-102页 |
| ·微球蛋白释放率的测定 | 第102-103页 |
| ·不同的PLA和PEG比例对蛋白释放率的影响 | 第103-104页 |
| ·过氧化氢酶微球释放过程中的pH改变 | 第104-105页 |
| ·温度对微球释放行为的影响 | 第105-106页 |
| 3.小结 | 第106-109页 |
| 参考文献 | 第109-116页 |
| 课题总结和展望 | 第116-119页 |
| 综述 | 第119-137页 |
| 论文发表情况 | 第137-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附录 | 第141-144页 |
