| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-17页 |
| 第一章 哺乳动物胚胎干细胞和胚胎生殖细胞 | 第17-50页 |
| ·ES 细胞研究的概况 | 第17-22页 |
| ·ES 细胞研究的历史起源：胚胎瘤细胞（Embryonic carcinoma cells or embryonic carcinoma stem cells, EC cells） | 第17-18页 |
| ·哺乳动物ES 细胞研究的历史与现状 | 第18-22页 |
| ·小鼠 | 第19-20页 |
| ·兔 | 第20页 |
| ·猪 | 第20-21页 |
| ·牛 | 第21-22页 |
| ·人类 | 第22页 |
| ·PGCS 来源的EG/ES 细胞研究概况 | 第22-25页 |
| ·小鼠 | 第22-23页 |
| ·兔 | 第23-24页 |
| ·牛 | 第24页 |
| ·猪 | 第24页 |
| ·人 | 第24-25页 |
| ·胚胎干细胞的生物学特性 | 第25-27页 |
| ·胚胎干细胞的生物学特性 | 第25页 |
| ·维持胚胎干细胞生物学特性的分子机制 | 第25-27页 |
| ·LIF 及其相应信号通路对ES 细胞多能性的维持 | 第26页 |
| ·BMP 信号通路 | 第26页 |
| ·Wnt 信号转导途径 | 第26页 |
| ·Oct 与ES 细胞多能性 | 第26-27页 |
| ·Nanog 与ES 细胞多能性维持 | 第27页 |
| ·ES 细胞分离建系的方法 | 第27-34页 |
| ·ES 细胞分离材料的获取及处理方法 | 第27-29页 |
| ·早期胚胎的处理方法 | 第27-28页 |
| ·PGCs 的分离 | 第28-29页 |
| ·ES 细胞的培养 | 第29-34页 |
| ·ES 细胞培养的分化抑制物 | 第29-30页 |
| ·常用基础培养基 | 第30页 |
| ·常用添加物 | 第30页 |
| ·ES 细胞的克隆和传代 | 第30-31页 |
| ·ES 细胞冷冻和解冻 | 第31页 |
| ·ES 细胞的鉴定方法 | 第31-34页 |
| ·影响ES 细胞分离建系的因素 | 第34-40页 |
| ·遗传背景对ES 细胞分离培养的影响 | 第34-35页 |
| ·胚龄与分离培养方式对ES 细胞建系的影响 | 第35-37页 |
| ·胚龄 | 第35-36页 |
| ·分离培养方式 | 第36-37页 |
| ·饲养层 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·条件培养液、细胞因子和生长因子 | 第38-40页 |
| ·条件培养液 | 第38-39页 |
| ·细胞因子和生长因子 | 第39-40页 |
| ·ES 细胞的体外分化研究现状 | 第40-47页 |
| ·胚胎干细胞诱导分化的一般方法 | 第41-42页 |
| ·细胞因子诱导法 | 第41页 |
| ·选择性标记基因筛选目的细胞法 | 第41页 |
| ·特异性转录因子异位表达法 | 第41-42页 |
| ·ES 细胞分化为造血细胞 | 第42-43页 |
| ·ES 细胞分化为神经细胞 | 第43-46页 |
| ·ES 细胞体外分化为心肌细胞 | 第46-47页 |
| ·由ES 细胞分化为胰岛细胞 | 第47页 |
| ·ES 细胞的应用前景 | 第47-50页 |
| ·生产克隆动物 | 第47-48页 |
| ·生产转基因动物 | 第48页 |
| ·研究发育和细胞分化 | 第48页 |
| ·在细胞和组织修复中的作用 | 第48-49页 |
| ·治疗性克隆 | 第49-50页 |
| 研究部分 | 第50-104页 |
| 前言 | 第50-52页 |
| 第二章 昆明小鼠胚胎干细胞分离、培养 | 第52-65页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·动物来源 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）饲养层的制备 | 第53页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液制备 | 第53-54页 |
| ·囊胚的获取与培养 | 第54页 |
| ·内细胞团的分离 | 第54页 |
| ·胚胎外胚层的分离与培养 | 第54页 |
| ·ES 细胞集落分离传代 | 第54-55页 |
| ·ES 细胞的鉴定 | 第55页 |
| ·ES 细胞和胎儿成纤维细胞的冷冻与解冻 | 第55页 |
| ·实验设计与统计方法 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-62页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的培养与饲养层的制备 | 第56页 |
| ·大鼠心肌细胞的分离培养 | 第56-57页 |
| ·品系对小鼠ES 细胞培养、克隆、分离、传代的影响 | 第57-58页 |
| ·不同日龄胚胎和不同取材方法对ES 细胞分离培养的影响 | 第58页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液对小鼠ES 细胞分离、培养、传代的影响 | 第58页 |
| ·不同消化液及消化方法对ES 细胞分离、克隆、传代的影响 | 第58-60页 |
| ·ES 细胞形态与生长方式观察 | 第60-61页 |
| ·碱性磷酸酶活性检查（AKP 染色） | 第61页 |
| ·体外分化能力 | 第61-62页 |
| ·核型分析 | 第62页 |
| ·ES 细胞和胎儿成纤维细胞的冷冻与解冻 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·品系和胚龄对ES 细胞分离培养的影响 | 第62页 |
| ·分离培养方式对ES 细胞培养建系的影响 | 第62-63页 |
| ·条件培养液、饲养层和细胞因子对ES 细胞分离培养的影响 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第三章 自PGCS 分离、克隆昆明小鼠EG 细胞的研究 | 第65-73页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）饲养层的制备 | 第65页 |
| ·PGCs 分离 | 第65-66页 |
| ·细胞传代 | 第66页 |
| ·碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第66页 |
| ·体外分化能力鉴定 | 第66页 |
| ·EG 细胞冷冻 | 第66页 |
| ·实验设计与统计方法 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·小鼠PGCs 生长情况 | 第66-68页 |
| ·不同PGCs 分离方式对小鼠EG 细胞分离、传代的效果 | 第68页 |
| ·不同传代方式对EG 细胞分离、克隆的影响 | 第68页 |
| ·不同日龄的胚胎分离培养EG 细胞的效果 | 第68-69页 |
| ·碱性磷酸酶活性检查（AKP 染色） | 第69-70页 |
| ·体外分化能力 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·胚胎日龄对EG 细胞分离培养的影响 | 第70页 |
| ·PGCs 分离方式对EG 细胞培养的影响 | 第70-71页 |
| ·消化液和传代方式对EG 细胞培养的影响 | 第71页 |
| ·细胞因子和饲养层对EG 细胞分离培养的影响 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 第四章 兔胚胎干细胞分离培养 | 第73-81页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·实验动物 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·胚胎获取及培养 | 第73页 |
| ·饲养层制备 | 第73-74页 |
| ·胚胎处理 | 第74页 |
| ·内细胞团集落的分离 | 第74页 |
| ·ES 细胞集落分离、传代 | 第74页 |
| ·ES 培养液 | 第74页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液的制备 | 第74页 |
| ·ES 细胞的鉴定 | 第74-75页 |
| ·ES 细胞的冷冻 | 第75页 |
| ·实验设计与统计方法 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-79页 |
| ·兔胚胎的形态特征 | 第75页 |
| ·不同饲养层对兔ES 细胞分离的效果 | 第75页 |
| ·不同胚胎处理方式对兔ES 细胞的分离效果 | 第75-78页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液对兔ES 细胞分离、传代的影响 | 第78页 |
| ·兔类ES 细胞的鉴定 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·胚胎日龄对ES 细胞分离的影响 | 第79页 |
| ·饲养层对ES 细胞分离的影响 | 第79页 |
| ·胚胎处理方式对ES 细胞分离的影响 | 第79-80页 |
| ·条件培养液和细胞因子对ES 细胞培养的影响 | 第80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第五章 自PGCS 分离克隆兔EG 细胞 | 第81-86页 |
| ·材料与方法 | 第81-82页 |
| ·材料 | 第81页 |
| ·实验动物 | 第81页 |
| ·试剂 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-82页 |
| ·兔胎儿的生殖嵴的获取 | 第81-82页 |
| ·胎儿生殖嵴的处理 | 第82页 |
| ·EG 细胞的传代培养 | 第82页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第82页 |
| ·体外分化试验 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-84页 |
| ·体外培养的兔PGCs 的生长情况 | 第82-83页 |
| ·兔PGCs 传代后的生长 | 第83页 |
| ·不同浓度的消化液对兔PGCs 分离培养的效果 | 第83-84页 |
| ·AKP 染色结果 | 第84页 |
| ·体外分化结果 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第六章 牛胚胎生殖细胞的分离与培养 | 第86-95页 |
| ·材料与方法 | 第86-88页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·牛胎儿 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-88页 |
| ·牛和小鼠胎儿成纤维细胞的分离培养与饲养层的制备 | 第86-87页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液的制备 | 第87页 |
| ·从牛胎儿生殖嵴分离与纯化PGCs | 第87页 |
| ·EG 细胞培养液 | 第87页 |
| ·细胞传代 | 第87-88页 |
| ·牛EG 细胞的鉴定 | 第88页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞和EG 细胞的冷冻与解冻 | 第88页 |
| ·数据统计方法 | 第88页 |
| ·结果 | 第88-91页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的生长情况 | 第88-89页 |
| ·牛PGCs 和EG 细胞的形态与生长方式 | 第89-90页 |
| ·不同饲养层对牛EG 细胞培养的效果 | 第90页 |
| ·不同的生殖嵴处理方式对牛EG 细胞分离培养的效果 | 第90页 |
| ·大鼠心肌细胞条件培养液用于牛EG 细胞培养的效果 | 第90-91页 |
| ·EG 细胞鉴定 | 第91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·胚龄对PGCs 分离培养的影响 | 第91-92页 |
| ·分离培养方式对PGCs 的影响 | 第92页 |
| ·条件培养液、细胞因子和饲养层对EG 细胞分离培养的影响 | 第92-93页 |
| ·小结 | 第93-95页 |
| 第七章 小鼠EG 细胞体外分化为神经细胞的研究 | 第95-104页 |
| ·材料与方法 | 第96-97页 |
| ·材料 | 第96页 |
| ·方法 | 第96-97页 |
| ·小鼠EG 细胞的分离与培养 | 第96页 |
| ·EG 细胞的体外神经分化与检测 | 第96-97页 |
| ·RA 诱导EG 细胞分化 | 第97页 |
| ·EG 细胞来源的神经前体细胞的传代培养与冷冻保存 | 第97页 |
| ·数据统计方法 | 第97页 |
| ·结果 | 第97-101页 |
| ·小鼠EG 多能干细胞在老化饲养层上的分化 | 第97-100页 |
| ·不同浓度RA 对EG 细胞的诱导效果 | 第100页 |
| ·EG 细胞来源的神经前体细胞的冷冻保存 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| ·EG 细胞的分化潜能 | 第101页 |
| ·不同诱导分化方法对ES 细胞神经分化的影响 | 第101-102页 |
| ·EG 细胞分化的时序性 | 第102-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 创新点 | 第105-106页 |
| 进一步研究的课题 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 缩略词 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 作者简介 | 第121页 |
