| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-31页 |
| 1 溶藻胶弧菌致病性研究进展 | 第12-15页 |
| ·溶藻胶弧菌简介 | 第12页 |
| ·溶藻胶弧菌致病机理 | 第12-15页 |
| ·毒性 | 第12页 |
| ·粘附 | 第12-13页 |
| ·毒力因子 | 第13-15页 |
| 2 rpoS 基因研究进展 | 第15-25页 |
| ·rpoS 基因简介 | 第15-19页 |
| ·复杂压力信号的整合 | 第19-20页 |
| ·rpoS 基因的表达调控 | 第20-23页 |
| ·rpoS 基因的转录调控 | 第20-21页 |
| ·rpoS 基因启动子 | 第20页 |
| ·调控rpoS 基因转录的因子 | 第20-21页 |
| ·rpoS 基因翻译的调控 | 第21-23页 |
| ·rpoS mRNA 二级结构的作用 | 第21-22页 |
| ·调控 rpoS 基因翻译的因子 | 第22-23页 |
| ·σ~S 因子的蛋白酶降解 | 第23-25页 |
| ·依赖于ClpXP 的σ~S 因子的降解 | 第23-24页 |
| ·σ~S 因子的降解应答调控子 | 第24-25页 |
| 3 VBNC 研究进展及溶藻胶弧菌VBNC 的概况 | 第25-30页 |
| ·细菌VBNC 状态的生物特性 | 第25-26页 |
| ·细菌在VBNC 状态下的形态 | 第25-26页 |
| ·VBNC 状态下细菌的生理生化特性 | 第26页 |
| ·细菌进入VBNC 状态的诱导因素 | 第26-28页 |
| ·理化因素 | 第26-28页 |
| ·生物因素 | 第28页 |
| ·VBNC 状态下细菌的复苏 | 第28-30页 |
| ·VBNC 状态下病原菌的致病性 | 第30页 |
| 4 本论文的研究目的意义 | 第30-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第31-33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·试剂和仪器 | 第34页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的克隆及鉴定 | 第34-38页 |
| ·溶藻胶弧菌基因组DNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·引物的设计及合成 | 第35页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第35页 |
| ·扩增产物的检测及纯化 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物克隆质粒的构建及序列测定 | 第36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·重组质粒的转化 | 第36-37页 |
| ·克隆质粒DNA 提取 | 第37页 |
| ·PCR 产物克隆质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·表达引物的设计与合成 | 第38页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的PCR 扩增 | 第38页 |
| ·pET-24d(+)/rpoS 表达质粒的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·rpoS 基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第39页 |
| ·Ni 琼脂糖亲和柱亲和层析 | 第39页 |
| ·rpoS 基因表达蛋白的SDS-PAGE 电泳检测 | 第39页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因突变株的构建 | 第39-41页 |
| ·rpoS 基因部分同源片段的制备 | 第39-40页 |
| ·rpoS 基因部分同源片段的克隆 | 第40页 |
| ·自杀质粒的制备 | 第40页 |
| ·重组质粒和自杀质粒pNQ705 的SalⅠ和SacⅠ双酶切和纯化 | 第40页 |
| ·rpoS 基因同源片段与自杀质粒的连接与转化 | 第40页 |
| ·细菌接合实验 | 第40-41页 |
| ·PCR 法鉴定溶藻胶弧菌rpoS 基因突变株 | 第41页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因突变株性质研究 | 第41-45页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株生长曲线的比较 | 第41-42页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株在不同pH 条件下的生长状况 | 第42页 |
| ·过氧化氢、高渗透压、长时期饥饿对溶藻胶弧菌突变株的影响 | 第42页 |
| ·溶藻胶弧菌突变菌株的VNBC 状态的研究 | 第42-43页 |
| ·溶藻胶弧菌突变株毒力的检测 | 第43页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株的几种酶活性比较 | 第43-44页 |
| ·卵磷脂酶活性检测 | 第43页 |
| ·淀粉酶活性检测 | 第43页 |
| ·脂酶活性检测 | 第43-44页 |
| ·统计分析 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-59页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的克隆及分析 | 第45-47页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的表达和纯化 | 第47-48页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因的构建与表达 | 第47-48页 |
| ·溶藻胶弧菌RpoS 蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因突变株的构建 | 第48-52页 |
| ·rpoS 基因部分编码区的扩增 | 第48-49页 |
| ·溶藻胶弧菌接合构建突变株 | 第49-50页 |
| ·溶藻胶弧菌突变株的鉴定 | 第50-52页 |
| ·溶藻胶弧菌rpoS 基因突变菌株性质分析 | 第52-59页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株生长曲线的测定 | 第52-53页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株在不同pH 条件下的生长状况 | 第53-54页 |
| ·溶藻胶弧菌突变株对过氧化氢、高渗透压、长时期饥饿条件的应答 | 第54-56页 |
| ·溶藻胶弧菌突变菌株诱导进入VNBC 状态 | 第56-57页 |
| ·溶藻胶弧菌突变株的毒性实验 | 第57-58页 |
| ·溶藻胶弧菌野生株和突变株的几种酶活性比较 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 附：大菱鲆血清免疫球蛋白IgM 的纯化及应用研究 | 第62-92页 |
| 中文摘要 | 第62-63页 |
| 英文摘要 | 第63-64页 |
| 前言 | 第64-66页 |
| 1 鱼类免疫球蛋白的研究现状及其进展 | 第64-65页 |
| 2 鱼类抗感染免疫研究进展 | 第65-66页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| ·实验材料与仪器 | 第66页 |
| ·大菱鲆血清免疫球蛋白IgM 的纯化 | 第66-67页 |
| ·大菱鲆血清制备 | 第66页 |
| ·饱和硫酸铵分步盐析 | 第66页 |
| ·Sepharose-4B 凝胶柱层析 | 第66-67页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析 | 第67页 |
| ·SDS- PAGE 电泳分析 | 第67页 |
| ·兔抗大菱鲆IgM 抗血清制备及其效价检测 | 第67-68页 |
| ·兔抗大菱鲆IgM 抗血清制备 | 第67页 |
| ·琼脂扩散法检测兔血清抗体效价 | 第67页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA)检测兔抗血清效价 | 第67页 |
| ·大菱鲆IgM 与其抗血清的斑点杂交试验 | 第67-68页 |
| ·大菱鲆IgM 与其抗血清的Western blot 检测 | 第68页 |
| ·ELISA 法检测大菱鲆接种灭活多联菌体疫苗后血清效价的变化 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-73页 |
| ·大菱鲆血清IgM 的纯化及其分子量的分析 | 第69页 |
| ·兔抗大菱鲆IgM 抗血清效价检测 | 第69-71页 |
| ·琼脂扩散法检测的效价 | 第69-70页 |
| ·ELISA 法检测的效价 | 第70页 |
| ·大菱鲆IgM 与其抗血清的斑点杂交 | 第70-71页 |
| ·大菱鲆IgM 与其抗血清的Western blot 分析 | 第71-72页 |
| ·用间接ELISA 方法检测免疫后大菱鲆血清特异性抗体变化 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 4 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-92页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第92-93页 |
| 附录Ⅱ 序列比对结 | 第93-96页 |
| 附录Ⅲ 发表和撰写的文章 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
