莱氏野村菌Nomuraea rileyi几丁质酶基因的克隆、表达与分析
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·昆虫病原真菌致病机理的研究进展 | 第11-19页 |
| ·昆虫病原真菌侵染的过程 | 第11-12页 |
| ·侵染过程中体壁降解酶的作用 | 第12-19页 |
| ·几丁质酶的研究进展 | 第19-20页 |
| ·莱氏野村菌的研究进展 | 第20-23页 |
| ·莱氏野村菌分类 | 第20-21页 |
| ·莱氏野村菌的流行病与人工诱导 | 第21页 |
| ·莱氏野村菌的田间应用 | 第21-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-26页 |
| ·研究目的和意义 | 第23-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第三章 材料与方法 | 第26-36页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株及主要载体 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·主要培养基 | 第27-28页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·真菌的培养及基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·质粒的提取方法及大肠杆菌转化方法 | 第29-30页 |
| ·几丁质酶基因chit1部分片段的克隆 | 第30页 |
| ·YADE法延伸3',5'端未知序列 | 第30-31页 |
| ·几丁质酶基因chit1上游序列继续延伸 | 第31页 |
| ·几丁质酶同源性和系统发育分析 | 第31页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·酵母表达载体的线性化及去磷酸化 | 第32页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·酵母转化子的G418筛选 | 第33页 |
| ·酵母转化子的PCR验证 | 第33-34页 |
| ·重组酵母的表达系统 | 第34页 |
| ·GlcNAc标准曲线的制定 | 第34页 |
| ·几丁质平板的制备 | 第34页 |
| ·几丁质酶活性的测定方法 | 第34-35页 |
| ·TCA法沉淀蛋白 | 第35-36页 |
| 第四章 结果与分析 | 第36-49页 |
| ·几丁质酶基因克隆与结构分析 | 第36-43页 |
| ·几丁质酶基因克隆 | 第36-37页 |
| ·限制内切酶的选择 | 第37页 |
| ·莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因及其结构 | 第37-40页 |
| ·不同真菌几丁质酶氨基酸同源性分析 | 第40-42页 |
| ·不同真菌来源的几丁质酶系统发育分析 | 第42-43页 |
| ·几丁质酶在毕赤酵母中的表达分析 | 第43-49页 |
| ·几丁质酶基因酵母表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·酵母转化子的G418筛选及PCR验证 | 第44-45页 |
| ·几丁质酶在毕赤酵母中的表达分析 | 第45-49页 |
| 第五章 讨论 | 第49-51页 |
| ·几丁质酶基因克隆与结构分析 | 第49页 |
| ·几丁质酶在毕赤酵母中的表达 | 第49-51页 |
| 第六章 结论 | 第51-53页 |
| ·莱氏野村菌几丁质酶基因的克隆与结构分析 | 第51页 |
| ·莱氏野村菌几丁质酶基因同源性分析 | 第51页 |
| ·几丁质酶表达载体的成功构建 | 第51-52页 |
| ·表达几丁质酶的活性 | 第52页 |
| ·表达几丁质酶的SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 在学期间所发表的文章 | 第61页 |
