| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 小肠上皮细胞体外培养的研究概况 | 第10-14页 |
| ·IEC体外培养的发展概况 | 第10-12页 |
| ·IEC的结构特点和作用 | 第12页 |
| ·小肠上皮细胞培养方法的建立 | 第12-14页 |
| 2 SV40介导的细胞永生化研究进展 | 第14-17页 |
| ·细胞永生化 | 第14-16页 |
| ·已建立的SV40转化的永生化细胞株 | 第16-17页 |
| 3 外源基因转染真核细胞技术的研究概况 | 第17-19页 |
| ·基因转染技术 | 第17页 |
| ·外源基因转染真核细胞的方法 | 第17-18页 |
| ·脂质体介导的基因转染 | 第18-19页 |
| 4 本论文研究的内容及意义 | 第19-20页 |
| 第一章 鹅小肠上皮细胞的体外培养研究 | 第20-38页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·组织来源 | 第20页 |
| ·仪器和用具 | 第20页 |
| ·试剂和药品 | 第20-21页 |
| ·培养用液 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-24页 |
| ·鹅IEC的分离 | 第21-22页 |
| ·鹅IEC的纯化 | 第22页 |
| ·鹅IEC的传代 | 第22-23页 |
| ·鹅IEC的鉴定 | 第23页 |
| ·鹅IEC生长曲线及细胞活率 | 第23-24页 |
| ·不同培养条件对鹅IEC生长的影响 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-33页 |
| ·鹅IEC的分离 | 第24-27页 |
| ·鹅IEC的纯化 | 第27页 |
| ·鹅IEC的传代 | 第27-28页 |
| ·鹅IEC的鉴定 | 第28-31页 |
| ·鹅IEC生长曲线及细胞活率 | 第31-32页 |
| ·不同培养条件对鹅IEC生长的影响 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-37页 |
| ·细胞培养中的问题 | 第34页 |
| ·酶消化法中消化酶的选择 | 第34-35页 |
| ·纯化方法的选择 | 第35-36页 |
| ·细胞培养条件 | 第36-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二章 pcDNA3.0-SV40T重组表达质粒的构建与鉴定 | 第38-47页 |
| 1 试验材料 | 第38-40页 |
| ·质粒 | 第38页 |
| ·宿主菌 | 第38页 |
| ·工具酶 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| 2 试验方法 | 第40-44页 |
| ·pGEM-SV40T质粒的提取及鉴定 | 第40-41页 |
| ·SV40T基因片段的制备 | 第41-43页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-SV40T的构建 | 第43-44页 |
| ·正向重组克隆的筛选 | 第44页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-SV40T的鉴定 | 第44页 |
| ·SV40T基因的序列测定 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·pGEM-SV40T质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pcDNA3.0-SV40T的鉴定 | 第45-46页 |
| ·SV40T基因的序列分析 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 重组质粒pcDNA3.0-SV40T在鹅IEC中的表达 | 第47-53页 |
| 1 试验材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-51页 |
| ·小肠上皮细胞的培养 | 第47页 |
| ·含有SV40T基因片段的重组质粒的制备 | 第47页 |
| ·脂质体介导转染小肠上皮细胞 | 第47-48页 |
| ·转染细胞基因组DNA PCR检测 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测转染细胞 | 第49-51页 |
| 3 结果与讨论 | 第51-52页 |
| ·PCR检测SV40T基因的表达 | 第51页 |
| ·RT-PCR检测SV40T基因mRNA的表达 | 第51-52页 |
| 4 小结 | 第52-53页 |
| 结论与研究展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |