| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| ·低温冷冻保存 | 第11-17页 |
| ·低温冷冻保存过程的损伤因素及假说 | 第11-13页 |
| ·低温冷冻保存方法 | 第13-15页 |
| ·低温冷冻保护剂 | 第15-16页 |
| ·低温冷冻保存研究的评价 | 第16-17页 |
| ·玻璃化低温冷冻保存方法 | 第17-22页 |
| ·玻璃化法的一般原理 | 第17-18页 |
| ·实现玻璃化的要素 | 第18-20页 |
| ·玻璃化法的一般步骤 | 第20-21页 |
| ·玻璃化法存在的问题 | 第21-22页 |
| ·神经干细胞的低温冷冻保存 | 第22-26页 |
| ·神经干细胞概述 | 第22-24页 |
| ·神经干细胞低温冷冻保存的意义 | 第24页 |
| ·神经干细胞低温冷冻保存方法 | 第24-25页 |
| ·神经干细胞球的玻璃化冷冻保存 | 第25-26页 |
| ·小结 | 第26-27页 |
| 2 神经干细胞的培养 | 第27-41页 |
| ·实验材料 | 第27-32页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·实验药品及试剂 | 第27-29页 |
| ·实验仪器装置 | 第29页 |
| ·实验所需溶液的配制方法 | 第29-32页 |
| ·实验方法 | 第32-36页 |
| ·神经干细胞的获得及原代培养 | 第32-33页 |
| ·神经干细胞的传代和继代培养 | 第33页 |
| ·神经干细胞生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| ·神经干细胞免疫组织化学鉴定 | 第34-36页 |
| ·实验结果与讨论 | 第36-40页 |
| ·神经干细胞原代和继代培养 | 第36-38页 |
| ·神经干细胞的生长曲线 | 第38-39页 |
| ·神经干细胞免疫组织化学鉴定 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 3.神经干细胞单细胞悬液的玻璃化冷冻研究 | 第41-52页 |
| ·概述 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验药品和试剂 | 第41-42页 |
| ·实验仪器装置 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·联合保护剂的配制及渗透压测定 | 第42-43页 |
| ·导入过程细胞体积变化的测定 | 第43-44页 |
| ·导入过程的设计及优化 | 第44-45页 |
| ·单细胞悬液的玻璃化冷冻 | 第45-46页 |
| ·细胞悬液的冻后培养及增殖能力鉴定 | 第46页 |
| ·冻后细胞免疫组织化学鉴定 | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·CPA渗透压标准曲线 | 第46-47页 |
| ·导入过程细胞体积变化 | 第47-48页 |
| ·导入过程的设计和优化 | 第48-49页 |
| ·单细胞悬液玻璃化冷冻效果 | 第49-50页 |
| ·NSCs单细胞悬液冻后生长状态及增殖能力 | 第50页 |
| ·NSCs冻后细胞的干细胞特异性鉴定 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 4.不同尺度神经干细胞球悬液的玻璃化冷冻研究(Ⅰ) | 第52-59页 |
| ·概述 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·实验药品与试剂 | 第52页 |
| ·实验仪器装置 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·神经干细胞球尺度的确定 | 第53页 |
| ·不同培养时间神经干细胞球悬液的玻璃化冻存 | 第53页 |
| ·冻存细胞的复苏与活性检测 | 第53-54页 |
| ·实验结果与讨论 | 第54-58页 |
| ·神经干细胞球直径随培养时间的分布统计 | 第54-55页 |
| ·不同尺度神经球冻存结果 | 第55-57页 |
| ·细胞冻后培养观察 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 5.不同尺度神经干细胞球悬液的玻璃化冷冻研究(Ⅱ) | 第59-71页 |
| ·概述 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·实验药品与试剂 | 第59-60页 |
| ·实验仪器装置 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·神经球尺度范围的划分 | 第61页 |
| ·不同尺度范围神经球的渗透平衡时间的测定 | 第61-62页 |
| ·不同尺度范围神经球的冷冻保存过程设计 | 第62页 |
| ·冻后细胞的复苏与活性检测 | 第62页 |
| ·冻后细胞染色鉴定(Hoechst/PI双染) | 第62-63页 |
| ·免疫组织化学鉴定 | 第63页 |
| ·实验结果与讨论 | 第63-70页 |
| ·不同尺度范围神经球一次性导入CPA的渗透平衡时间 | 第63-65页 |
| ·不同尺度范围神经球的玻璃化冻后活性比较 | 第65-67页 |
| ·冻后细胞球的完整性及细胞活性 | 第67-68页 |
| ·冻后细胞的免疫组织化学鉴定 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录A 英文缩略语 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
