| 内容提要 | 第1-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-28页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第9-15页 |
| ·脂肪酶的结构和催化机理 | 第10-13页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第14-15页 |
| ·根霉脂肪酶的研究进展 | 第15-21页 |
| ·根霉脂肪酶的生物化学性质 | 第16页 |
| ·根霉脂肪酶的分子遗传学 | 第16-18页 |
| ·ROL的前序列的作用 | 第18页 |
| ·根霉脂肪酶的结构 | 第18-19页 |
| ·根霉脂肪酶的蛋白质工程 | 第19-21页 |
| ·本课题的研究背景和设计思想 | 第21-23页 |
| ·研究背景 | 第21-23页 |
| ·设计思路 | 第23页 |
| ·参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 Rhizopus delemar 脂肪酶基因的克隆 | 第28-38页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料与仪器 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·Rhizopus delemar 5564 菌种的活化和培养 | 第30页 |
| ·Rhizopus delemar 总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·逆转录PCR扩增Rhizopus delemar 脂肪酶基因 | 第31-34页 |
| ·目的片段的T-A克隆 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-37页 |
| ·Rhizopus delemar 5564 菌种的活化培养 | 第35页 |
| ·Rhizopus delemar 5564 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·逆转录PCR反应扩增目的基因 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 Rhizopus delemar 脂肪酶基因在大肠杆菌中的表达和性质研究 | 第38-61页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料与仪器 | 第39-43页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-50页 |
| ·质粒构建过程 | 第43页 |
| ·引物的设计 | 第43-44页 |
| ·目的基因片段的连接 | 第44-45页 |
| ·PCR纯化产物的限制性酶切和纯化 | 第45页 |
| ·载体DNA限制性酶切和纯化 | 第45页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的转化 | 第46页 |
| ·重组质粒提取 | 第46页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·酶活力的测定 | 第47-48页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第48-49页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第49页 |
| ·Ni-NTA 亲和层析纯化 | 第49页 |
| ·重组RDL基本酶学性质的测定 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-59页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·目的基因与pET28b重组质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第52-54页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·基本酶学性质 | 第55-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| ·存在的问题 | 第60-61页 |
| 第四章 Rhizopus delemar 脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第61-76页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料与仪器 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-68页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第63-66页 |
| ·重组毕赤酵母细胞的构建 | 第66页 |
| ·重组毕赤酵母表型的鉴定 | 第66页 |
| ·重组毕赤酵母基因组的提取（玻璃珠法） | 第66-67页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第67页 |
| ·重组毕赤酵母的表达 | 第67页 |
| ·表达条件的优化 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-75页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第68页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第69-70页 |
| ·酵母表型的鉴定 | 第70页 |
| ·重组酵母基因组的提取 | 第70页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第70-71页 |
| ·平板筛选 | 第71-72页 |
| ·表达条件的优化 | 第72-75页 |
| ·小结 | 第75页 |
| ·建议 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 中文摘要 | 第77-79页 |
| Abstract | 第79-81页 |
