| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1 肝脏中的糖/脂代谢 | 第17-23页 |
| ·概述 | 第17-19页 |
| ·糖代谢 | 第19-20页 |
| ·糖酵解 | 第19-20页 |
| ·肝糖原合成与分解 | 第20页 |
| ·脂代谢 | 第20-22页 |
| ·脂肪酸合成 | 第21页 |
| ·脂肪酸氧化 | 第21-22页 |
| ·糖代谢与脂代谢的相互关系 | 第22-23页 |
| 2 糖/脂代谢相关因子 | 第23-29页 |
| ·过氧化酶增值体激活受体 | 第23-24页 |
| ·胆固醇应答元件结合蛋白 | 第24-26页 |
| ·cAMP应答元件结合蛋白 | 第26-27页 |
| ·脂肪酸合成酶 | 第27-28页 |
| ·葡萄糖转运蛋白 | 第28-29页 |
| 3 糖应答元件结合蛋白 | 第29-36页 |
| ·ChREBP的发现 | 第29-30页 |
| ·ChREBP的结构生物学 | 第30-31页 |
| ·糖/脂代谢中ChREBP的作用 | 第31-34页 |
| ·ChREBP在葡萄糖代谢中的作用 | 第32页 |
| ·ChREBP对的脂酶的调控作用 | 第32-34页 |
| ·ChREBP蛋白的调控 | 第34-36页 |
| ·ChREBP表达的调控 | 第34页 |
| ·ChREBP活性的调控 | 第34-36页 |
| 4 乙酰辅酶A羧化酶 | 第36-39页 |
| ·ACCs在脂肪酸合成和氧化中的作用 | 第36-37页 |
| ·ACCs基因表达及功能的调控 | 第37-38页 |
| ·ACCs基因启动子区域分析 | 第38-39页 |
| 5 游离脂肪酸对糖/脂代谢途径的影响 | 第39-43页 |
| ·概述 | 第39-40页 |
| ·不饱和脂肪酸的调控作用 | 第40-42页 |
| ·PUFAs对SREBP-1c基因的调控作用 | 第41页 |
| ·PUFAs对ChREBP基因的调控作用 | 第41-42页 |
| ·花生四稀酸的调控作用 | 第42-43页 |
| ·花生四烯酸在炎症中的作用 | 第42页 |
| ·花生四烯酸在糖/脂代谢中的作用 | 第42-43页 |
| 第二章 猪CHREBP基因的克隆、染色体定位和组织表达谱分析 | 第43-55页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第43-45页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·样品采集 | 第43-44页 |
| ·菌株及质粒 | 第44页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要溶液配制 | 第45页 |
| 3 实验方法 | 第45-49页 |
| ·组织样品总RNA提取 | 第45页 |
| ·总RNA纯化 | 第45-46页 |
| ·总RNA纯度鉴定 | 第46页 |
| ·目标片段的扩增与纯化 | 第46-48页 |
| ·ChREBP扩增引物 | 第46-47页 |
| ·ChREBP的扩增 | 第47-48页 |
| ·片段的扩增 | 第47页 |
| ·PCR产物的检测、纯化、克隆与测序 | 第47-48页 |
| ·ChREBP的组织表达谱分析 | 第48页 |
| ·模版的准备 | 第48页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·PCR扩增指数期循环数的确定 | 第48页 |
| ·半定量分析 | 第48页 |
| ·数据统计分析 | 第48页 |
| ·ChREBP的染色体定位 | 第48-49页 |
| ·ChREBP内含子的扩增 | 第48-49页 |
| ·定位所用引物的设计 | 第49页 |
| ·PCR扩增分型方法 | 第49页 |
| ·数据分析方法 | 第49页 |
| 4 结果 | 第49-54页 |
| ·猪ChREBP的克隆 | 第49-50页 |
| ·猪ChREBP基因的组织表达谱分析 | 第50-51页 |
| ·猪ChREBP基因的染色体定位 | 第51-52页 |
| ·猪ChREBP基因与人、小鼠和大鼠基因的同源性对比 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 葡萄糖和胰岛素对CHREBP表达的调控 | 第55-63页 |
| 1 前言 | 第55页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·实验细胞 | 第55页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第55-56页 |
| 3 实验方法 | 第56-57页 |
| ·细胞培养 | 第56页 |
| ·细胞诱导培养 | 第56页 |
| ·细胞RNA提取和纯化 | 第56页 |
| ·Real-time PCR | 第56-57页 |
| ·检测引物的设计 | 第56-57页 |
| ·Real-time PCR扩增条件 | 第57页 |
| ·数据统计分析 | 第57页 |
| 4 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·葡萄糖对ChREBP的调控 | 第57-59页 |
| ·基因对葡萄糖的浓度依赖性 | 第57-58页 |
| ·基因对葡萄糖的时间依赖性 | 第58-59页 |
| ·胰岛素对ChREBP的调控 | 第59-61页 |
| ·基因对胰岛素的浓度依赖性 | 第59-60页 |
| ·基因对胰岛素的时间依赖性 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 ACC1启动子活性及其调控 | 第63-78页 |
| 1 前言 | 第63-64页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第64-65页 |
| ·实验细胞 | 第64页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第64-65页 |
| 3 实验方法 | 第65-70页 |
| ·转录因子真核表达载体的构建 | 第65页 |
| ·组织总蛋白的提取 | 第65-66页 |
| ·Western blotting | 第66-67页 |
| ·ACC1启动子序列真核表达载体的构建 | 第67页 |
| ·质粒的大量提取 | 第67-68页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第68页 |
| ·细胞培养 | 第68页 |
| ·细胞转染 | 第68-69页 |
| ·细胞RNA提取和纯化 | 第69页 |
| ·Real-time PCR | 第69页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第69-70页 |
| ·数据统计分析 | 第70页 |
| 4 结果 | 第70-76页 |
| ·转录因子真核表达载体的构建 | 第70页 |
| ·ChREBP和SREBP-1c基因在HepG2细胞中超表达 | 第70-72页 |
| ·ChREBP和SREBP-1c对靶基因表达的影响 | 第72-73页 |
| ·ACC1变体蛋白的检测 | 第73-74页 |
| ·ACC1启动子区的真核表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·转录因子对ACC1启动子活性的影响 | 第75-76页 |
| ·转录因子对ACC1 PⅠ启动子活性的影响 | 第75-76页 |
| ·转录因子对ACC1 PⅡ启动子活性的影响 | 第76页 |
| 5 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 CREB1介导花生四烯酸对ACC1表达的调控作用 | 第78-95页 |
| 1 前言 | 第78-79页 |
| 2 实验材料与试剂 | 第79页 |
| ·实验细胞 | 第79页 |
| ·主要仪器、试剂及溶液配制 | 第79页 |
| 3 实验方法 | 第79-81页 |
| ·细胞培养 | 第79页 |
| ·细胞诱导培养 | 第79-80页 |
| ·细胞RNA提取和纯化 | 第80页 |
| ·表达载体和启动子载体的构建 | 第80页 |
| ·质粒的大量提取 | 第80页 |
| ·质粒浓度和纯度检测 | 第80页 |
| ·Real-time PCR | 第80-81页 |
| ·基因检测引物的设计 | 第80页 |
| ·Real-time PCR扩增条件 | 第80-81页 |
| ·培养液中葡萄糖含量的检测 | 第81页 |
| ·细胞中甘油三酯(TG)含量的检测 | 第81页 |
| ·数据统计分析 | 第81页 |
| 4 结果 | 第81-92页 |
| ·游离脂肪酸对ACC1基因的表达影响 | 第81-85页 |
| ·花生四烯酸对ACC1基因表达的影响 | 第85-86页 |
| ·花生四稀酸对相关调控因子表达的影响 | 第86-87页 |
| ·CREB1在HepG2细胞中超表达 | 第87页 |
| ·CREB1对ACC1表达的调控作用 | 第87-88页 |
| ·花生四烯酸和CREB1对糖/脂代谢相关因子的影响 | 第88-92页 |
| ·ACC1启动子对花生四烯酸的应答作用 | 第92页 |
| 5 讨论 | 第92-95页 |
| 结论与创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-115页 |
