中文摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-11页 |
前言 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-27页 |
·植物细胞培养的工程化 | 第12-16页 |
·植物细胞大规模培养的现状 | 第13-14页 |
·植物细胞培养的工程科学问题 | 第14-16页 |
·鼓泡塔生物反应器中细胞对微环境的响应 | 第16-21页 |
·植物细胞培养的生物反应器 | 第16-17页 |
·鼓泡塔生物反应器的特点 | 第17-18页 |
·鼓泡塔内流体力学研究 | 第18-19页 |
·鼓泡塔反应器内细胞-气泡相互作用 | 第19-20页 |
·鼓泡塔反应器内细胞损伤及其保护机理 | 第20-21页 |
·植物细胞对机械胁迫的生理应答 | 第21-24页 |
·活性氧与机械胁迫 | 第22页 |
·一氧化氮与机械胁迫 | 第22-23页 |
·基因表达与机械胁迫 | 第23-24页 |
·脂质组学研究 | 第24-26页 |
·本论文的研究意义和主要研究内容 | 第26-27页 |
第二章 激光多普勒测速方法对鼓泡塔反应器内的流体湍动剪切力的研究 | 第27-40页 |
·引言 | 第27页 |
·实验材料与方法 | 第27-31页 |
·培养基密度与粘度测定 | 第27-28页 |
·鼓泡塔生物反应器实验装置 | 第28-29页 |
·激光多普勒测速(LDA)实验装置 | 第29-31页 |
·测量节点选取 | 第31页 |
·流体剪切理论 | 第31-32页 |
·结果与讨论 | 第32-39页 |
·液相速度随时间的波动 | 第32-33页 |
·测量结果的坐标转换 | 第33-34页 |
·雷诺应力(Reynolds stress)的计算 | 第34-35页 |
·不同截面雷诺应力场的分布 | 第35-37页 |
·不同鼓泡孔径反应器内雷诺应力场的分布 | 第37-39页 |
·小结 | 第39-40页 |
第三章 鼓泡对反应器内东北红豆杉细胞生长的影响 | 第40-52页 |
·引言 | 第40页 |
·实验材料与方法 | 第40-44页 |
·主要试剂与药品 | 第40页 |
·主要仪器设备 | 第40-41页 |
·细胞株系及其培养 | 第41页 |
·生物反应器装置 | 第41页 |
·体积氧传递系数KLa 的测定 | 第41-42页 |
·细胞生物量的测定 | 第42页 |
·胞外蔗糖含量的测定 | 第42页 |
·胞外可溶性磷含量的测定 | 第42-43页 |
·细胞活力的测定 | 第43页 |
·细胞膜通透性的测定 | 第43-44页 |
·结果与讨论 | 第44-51页 |
·不同鼓泡孔径对体积氧传递系数KLa 的影响 | 第44页 |
·不同鼓泡孔径对红豆杉细胞生长的影响 | 第44-47页 |
·培养体积对红豆杉细胞生长的影响 | 第47-48页 |
·PF-68 对红豆杉细胞损伤的保护 | 第48-51页 |
·小结 | 第51-52页 |
第四章 RT-PCR 研究鼓泡塔反应器中紫杉醇合成途径相关基因的转录水平 | 第52-69页 |
·引言 | 第52页 |
·实验材料和方法 | 第52-57页 |
·主要试剂与药品 | 第52页 |
·主要仪器设备 | 第52-53页 |
·细胞株系及其培养 | 第53页 |
·生物反应器装置 | 第53页 |
·总RNA 提取 | 第53-54页 |
·引物设计 | 第54页 |
·普通RT-PCR 及产物测序 | 第54-55页 |
·第一链cDNA 合成 | 第55-56页 |
·实时荧光PCR | 第56页 |
·mRNA 的相对定量 | 第56-57页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
·细胞线粒体活性的测定 | 第57页 |
·结果与讨论 | 第57-68页 |
·HMGR 基因的cDNA 克隆及分析 | 第57-60页 |
·RT-PCR 产物分析 | 第60-61页 |
·反应器培养与摇瓶培养下红豆杉细胞基因表达水平差异 | 第61-67页 |
·不同鼓泡孔径的反应器内基因表达水平 | 第67-68页 |
·小结 | 第68-69页 |
第五章 鼓泡塔反应器中细胞活性氧、PAL 酶以及LOX 酶的研究 | 第69-80页 |
·引言 | 第69页 |
·实验材料与方法 | 第69-73页 |
·主要试剂与药品 | 第69-70页 |
·主要仪器设备 | 第70页 |
·细胞株系及其培养 | 第70页 |
·生物反应器装置 | 第70页 |
·蛋白含量的测定 | 第70页 |
·活性氧(ROS)含量测定 | 第70-71页 |
·NO 含量测定 | 第71-72页 |
·PAL 酶活的测定 | 第72页 |
·LOX 酶活的测定 | 第72-73页 |
·结果与讨论 | 第73-79页 |
·鼓泡塔反应器内机械胁迫下活性氧(ROS)的产生 | 第73-74页 |
·鼓泡塔反应器内机械胁迫下一氧化氮(NO)的产生 | 第74-76页 |
·鼓泡塔反应器内机械胁迫下PAL 酶活的变化 | 第76-77页 |
·鼓泡塔反应器内机械胁迫下LOX 酶活的变化 | 第77-79页 |
·小结 | 第79-80页 |
第六章 鼓泡塔反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂代谢差异 | 第80-97页 |
·引言 | 第80页 |
·实验材料与方法 | 第80-84页 |
·主要试剂与药品 | 第80-81页 |
·主要仪器设备 | 第81页 |
·细胞株系及其培养 | 第81页 |
·生物反应器装置 | 第81页 |
·HPLC/ESI-MS 条件 | 第81-83页 |
·红豆杉细胞磷脂的提取 | 第83页 |
·多元统计分析 | 第83-84页 |
·结果与讨论 | 第84-96页 |
·东北红豆杉细胞的磷脂图谱 | 第84-86页 |
·反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂差异分析 | 第86-95页 |
·磷脂信号分子与其他信号分子的相互关系 | 第95-96页 |
·小结 | 第96-97页 |
第七章 结论与展望 | 第97-100页 |
·结论 | 第97-98页 |
·展望 | 第98-100页 |
参考文献 | 第100-116页 |
发表论文和科研情况说明 | 第116-117页 |
附录一 Visual basic 程序 | 第117-120页 |
致谢 | 第120页 |