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鼓泡塔生物反应器中悬浮培养红豆杉细胞的防御应答

中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
前言第11-12页
第一章 文献综述第12-27页
   ·植物细胞培养的工程化第12-16页
     ·植物细胞大规模培养的现状第13-14页
     ·植物细胞培养的工程科学问题第14-16页
   ·鼓泡塔生物反应器中细胞对微环境的响应第16-21页
     ·植物细胞培养的生物反应器第16-17页
     ·鼓泡塔生物反应器的特点第17-18页
     ·鼓泡塔内流体力学研究第18-19页
     ·鼓泡塔反应器内细胞-气泡相互作用第19-20页
     ·鼓泡塔反应器内细胞损伤及其保护机理第20-21页
   ·植物细胞对机械胁迫的生理应答第21-24页
     ·活性氧与机械胁迫第22页
     ·一氧化氮与机械胁迫第22-23页
     ·基因表达与机械胁迫第23-24页
   ·脂质组学研究第24-26页
   ·本论文的研究意义和主要研究内容第26-27页
第二章 激光多普勒测速方法对鼓泡塔反应器内的流体湍动剪切力的研究第27-40页
   ·引言第27页
   ·实验材料与方法第27-31页
     ·培养基密度与粘度测定第27-28页
     ·鼓泡塔生物反应器实验装置第28-29页
     ·激光多普勒测速(LDA)实验装置第29-31页
     ·测量节点选取第31页
   ·流体剪切理论第31-32页
   ·结果与讨论第32-39页
     ·液相速度随时间的波动第32-33页
     ·测量结果的坐标转换第33-34页
     ·雷诺应力(Reynolds stress)的计算第34-35页
     ·不同截面雷诺应力场的分布第35-37页
     ·不同鼓泡孔径反应器内雷诺应力场的分布第37-39页
   ·小结第39-40页
第三章 鼓泡对反应器内东北红豆杉细胞生长的影响第40-52页
   ·引言第40页
   ·实验材料与方法第40-44页
     ·主要试剂与药品第40页
     ·主要仪器设备第40-41页
     ·细胞株系及其培养第41页
     ·生物反应器装置第41页
     ·体积氧传递系数KLa 的测定第41-42页
     ·细胞生物量的测定第42页
     ·胞外蔗糖含量的测定第42页
     ·胞外可溶性磷含量的测定第42-43页
     ·细胞活力的测定第43页
     ·细胞膜通透性的测定第43-44页
   ·结果与讨论第44-51页
     ·不同鼓泡孔径对体积氧传递系数KLa 的影响第44页
     ·不同鼓泡孔径对红豆杉细胞生长的影响第44-47页
     ·培养体积对红豆杉细胞生长的影响第47-48页
     ·PF-68 对红豆杉细胞损伤的保护第48-51页
   ·小结第51-52页
第四章 RT-PCR 研究鼓泡塔反应器中紫杉醇合成途径相关基因的转录水平第52-69页
   ·引言第52页
   ·实验材料和方法第52-57页
     ·主要试剂与药品第52页
     ·主要仪器设备第52-53页
     ·细胞株系及其培养第53页
     ·生物反应器装置第53页
     ·总RNA 提取第53-54页
     ·引物设计第54页
     ·普通RT-PCR 及产物测序第54-55页
     ·第一链cDNA 合成第55-56页
     ·实时荧光PCR第56页
     ·mRNA 的相对定量第56-57页
     ·琼脂糖凝胶电泳第57页
     ·细胞线粒体活性的测定第57页
   ·结果与讨论第57-68页
     ·HMGR 基因的cDNA 克隆及分析第57-60页
     ·RT-PCR 产物分析第60-61页
     ·反应器培养与摇瓶培养下红豆杉细胞基因表达水平差异第61-67页
     ·不同鼓泡孔径的反应器内基因表达水平第67-68页
   ·小结第68-69页
第五章 鼓泡塔反应器中细胞活性氧、PAL 酶以及LOX 酶的研究第69-80页
   ·引言第69页
   ·实验材料与方法第69-73页
     ·主要试剂与药品第69-70页
     ·主要仪器设备第70页
     ·细胞株系及其培养第70页
     ·生物反应器装置第70页
     ·蛋白含量的测定第70页
     ·活性氧(ROS)含量测定第70-71页
     ·NO 含量测定第71-72页
     ·PAL 酶活的测定第72页
     ·LOX 酶活的测定第72-73页
   ·结果与讨论第73-79页
     ·鼓泡塔反应器内机械胁迫下活性氧(ROS)的产生第73-74页
     ·鼓泡塔反应器内机械胁迫下一氧化氮(NO)的产生第74-76页
     ·鼓泡塔反应器内机械胁迫下PAL 酶活的变化第76-77页
     ·鼓泡塔反应器内机械胁迫下LOX 酶活的变化第77-79页
   ·小结第79-80页
第六章 鼓泡塔反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂代谢差异第80-97页
   ·引言第80页
   ·实验材料与方法第80-84页
     ·主要试剂与药品第80-81页
     ·主要仪器设备第81页
     ·细胞株系及其培养第81页
     ·生物反应器装置第81页
     ·HPLC/ESI-MS 条件第81-83页
     ·红豆杉细胞磷脂的提取第83页
     ·多元统计分析第83-84页
   ·结果与讨论第84-96页
     ·东北红豆杉细胞的磷脂图谱第84-86页
     ·反应器培养与摇瓶培养的细胞磷脂差异分析第86-95页
     ·磷脂信号分子与其他信号分子的相互关系第95-96页
   ·小结第96-97页
第七章 结论与展望第97-100页
   ·结论第97-98页
   ·展望第98-100页
参考文献第100-116页
发表论文和科研情况说明第116-117页
附录一 Visual basic 程序第117-120页
致谢第120页

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