| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-25页 |
| ·选题意义 | 第18页 |
| ·国内外研究现状 | 第18-23页 |
| ·纤维素类物质及其结构组成 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶基因工程菌 | 第20-23页 |
| ·研究目的及研究内容 | 第23-25页 |
| ·研究目的 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 高活性纤维素酶产生菌的选育 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·菌种富集 | 第26页 |
| ·初筛 | 第26-27页 |
| ·复筛 | 第27页 |
| ·酶液制备 | 第27页 |
| ·原生质体制备及诱变选育 | 第27-28页 |
| ·稳定性试验 | 第28页 |
| ·分析方法 | 第28-29页 |
| ·试验结果 | 第29-36页 |
| ·葡萄糖标准曲线 | 第29-30页 |
| ·菌种筛选 | 第30-32页 |
| ·原生质体紫外诱变 | 第32-34页 |
| ·产酶特性研究 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第三章 纤维素酶产生菌的鉴定 | 第37-48页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌种及载体 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·平板培养 | 第38页 |
| ·形态观察 | 第38-39页 |
| ·形态学鉴定 | 第39页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·ITS-5.8S rDNA扩增 | 第40页 |
| ·目的片段克隆与测序 | 第40-43页 |
| ·系统发育树的构建 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·形态学鉴定 | 第43-44页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第44-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 内切葡聚糖苷酶EG的原核表达 | 第48-64页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌种及载体 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-57页 |
| ·菌丝体预处理 | 第50页 |
| ·菌丝体mRNA提取 | 第50-51页 |
| ·单链cDNA全长合成 | 第51页 |
| ·目的片段扩增 | 第51-52页 |
| ·连接T载体转染大肠杆菌 | 第52页 |
| ·序列分析 | 第52-53页 |
| ·pucm-T-EG的提取 | 第53页 |
| ·质粒及表达载体pET20b双酶切 | 第53-54页 |
| ·表达质粒pET20b-EG构建 | 第54页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态制备 | 第54-55页 |
| ·转染大肠杆菌BL21(DE3) | 第55页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第55页 |
| ·酶切验证 | 第55-56页 |
| ·发酵性能测定 | 第56页 |
| ·内切葡聚糖苷酶分子量测定 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-62页 |
| ·mRNA纯度鉴定 | 第57页 |
| ·目的片段扩增 | 第57-58页 |
| ·序列测定及分析 | 第58-59页 |
| ·pucm-T-EG质粒提取及双酶切 | 第59-60页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第60页 |
| ·酶切验证 | 第60-61页 |
| ·发酵性能实验 | 第61-62页 |
| ·相对分子量测定 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-64页 |
| 第五章 纤维素酶表达型文库的构建 | 第64-80页 |
| ·实验材料 | 第64-66页 |
| ·菌种及载体 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·主要试剂及器材 | 第65-66页 |
| ·器材与仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-73页 |
| ·菌丝体预处理 | 第66页 |
| ·mRNA提取及纯度鉴定 | 第66页 |
| ·cDNA双链全长合成 | 第66-68页 |
| ·接头连接 | 第68页 |
| ·Not Ⅰ酶切 | 第68页 |
| ·去除短链cDNA | 第68-69页 |
| ·pPIC9K原核宿主菌的培养及质粒pPIC9K提取 | 第69-70页 |
| ·质粒双酶切 | 第70页 |
| ·表达质粒pPIC9K-cDNA的构建 | 第70页 |
| ·表达质粒线性化 | 第70-71页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态制备 | 第71-72页 |
| ·转化毕赤酵母GS115 | 第72页 |
| ·阳性克隆的筛选及序列分析 | 第72-73页 |
| ·发酵性能的测定 | 第73页 |
| ·发酵液纯化及SDS-PAGE | 第73页 |
| ·实验结果 | 第73-79页 |
| ·pPI9K质粒的提取 | 第73-74页 |
| ·阳性克隆的双酶切验证 | 第74-75页 |
| ·序列分析 | 第75-76页 |
| ·发酵性能 | 第76-77页 |
| ·SDS-PAGE | 第77-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第六章 结论与展望 | 第80-82页 |
| ·结论 | 第80-81页 |
| ·展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 本人在攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第94页 |