| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 绪论 | 第11-20页 |
| 1.节杆菌简介 | 第11-14页 |
| ·节杆菌的分类特点 | 第11页 |
| ·节杆菌的研究意义 | 第11-14页 |
| 2.微生物的冷休克 | 第14-15页 |
| 3.海藻糖的功能 | 第15-17页 |
| 4.海藻糖的合成途径 | 第17-18页 |
| 5.海藻糖-6-磷酸合成酶的功能及意义 | 第18-20页 |
| 第一部分 低温下节杆菌OtsA催化效率与其N-loop结构之间的关系 | 第20-40页 |
| 第一章 研究背景及立题依据 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-29页 |
| 1.实验材料 | 第22页 |
| ·实验菌株 | 第22页 |
| ·培养条件 | 第22页 |
| 2.实验方法 | 第22-29页 |
| ·otsA N-loop交换突变体的构建 | 第22-26页 |
| ·表达质粒的构建 | 第26页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第26页 |
| ·酶活分析 | 第26-28页 |
| ·N-loop相对柔韧度统计分析 | 第28-29页 |
| 第三章 实验结果 | 第29-38页 |
| 1.节杆菌Arthrobacter sp.Cjts otsA在基因组中的位置及序列比对 | 第29-30页 |
| 2.OtsA重组蛋白的表达和纯化 | 第30-32页 |
| 3.节杆菌与大肠杆菌OtsA低温下催化效率比较 | 第32-34页 |
| 4.低温下N-loop影响OtsA对UDP-葡萄糖的亲和性 | 第34-35页 |
| 5.低温下N-loop影响OtsA的催化效率 | 第35-36页 |
| 6.低温菌OtsA的N-loop具有更高的柔韧度 | 第36-38页 |
| 第四章 讨论 | 第38-40页 |
| 第二部分 节杆菌OtsA在冷休克下的表达调控 | 第40-78页 |
| 第一章 研究背景及立题依据 | 第40-42页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第42-54页 |
| 1.实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验菌株 | 第42页 |
| ·培养条件 | 第42-43页 |
| 2.实验方法 | 第43-54页 |
| ·基因的克隆 | 第44-46页 |
| ·质粒构建 | 第46-47页 |
| ·节杆菌的电击转化 | 第47页 |
| ·otsA基因敲除突变体的构建 | 第47-48页 |
| ·海藻糖含量的测定 | 第48页 |
| ·蛋白的小量纯化 | 第48-49页 |
| ·抗体制备 | 第49页 |
| ·测抗体效价检测 | 第49-50页 |
| ·抗体的纯化 | 第50页 |
| ·Western Blot | 第50-51页 |
| ·免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation,coIP) | 第51-52页 |
| ·免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第52页 |
| ·蛋白质的质谱分析 | 第52-54页 |
| 第三章 实验结果 | 第54-76页 |
| 1.节杆菌Arthrobacter Strain A3的特性 | 第54-55页 |
| 2.基因序列 | 第55-59页 |
| 3.低温下节杆菌体内海藻糖水平的降低伴随着OtsA的含量的下降 | 第59-64页 |
| 4.低温抑制OtsA的合成 | 第64-66页 |
| 5.海藻糖的积累抑制OtsA的合成 | 第66-68页 |
| 6.OtsA与EF-Tu相互作用 | 第68-71页 |
| 7.低温增强OtsA与EF-Tu的相互作用 | 第71-73页 |
| 8.低温下EF-Tu在OtsA存在情况下促进OtsA含量的稳定 | 第73-76页 |
| 第四章 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-91页 |
| 发表论文情况 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
