中文摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
目录 | 第10-13页 |
第一章 前言 | 第13-34页 |
1. 染色质调控 | 第13-14页 |
2. 溴结构域(Bromodomain)的研究进展 | 第14-23页 |
·Bromodomain的发现 | 第14页 |
·Bromodomain的一级结构 | 第14-15页 |
·Bromodomain的空间结构 | 第15-17页 |
·人bromodomain家族 | 第17-18页 |
·与bromodomain相关的结构域 | 第18-19页 |
·Bromodomain的功能 | 第19-23页 |
3. Brpf1蛋白研究进展 | 第23-24页 |
·Brpf1基因的发现 | 第23页 |
·Brpf1蛋白的功能 | 第23-24页 |
4. Rhox5蛋白研究进展 | 第24-32页 |
·同源异型框基因家族 | 第24-26页 |
·Rhox基因簇 | 第26-27页 |
·Rhox5基因及其表达模式 | 第27-28页 |
·Rhox5基因表达的调控 | 第28-30页 |
·Rhox5的表观遗传调控 | 第30页 |
·Rhox5靶向的基因 | 第30-31页 |
·与Rhox5蛋白相互作用的蛋白 | 第31-32页 |
5. 本研究的意义、创新性和目标 | 第32-34页 |
第二章 Brpf1及其新型转录木Brpf2的鉴定及表达谱分析 | 第34-67页 |
1. 前言 | 第34页 |
2. 实验仪器与材料 | 第34-39页 |
·主要仪器 | 第34-35页 |
·主要试剂及耗材 | 第35-36页 |
·试剂配置 | 第36-39页 |
3. 实验方法 | 第39-51页 |
·酵母细胞中质粒的抽提 | 第39-40页 |
·电转化 | 第40页 |
·大肠杆菌中质粒的抽提 | 第40-41页 |
·小鼠各组织总RNA的抽提 | 第41-42页 |
·Rr-PCR | 第42-44页 |
·Northern Blotting | 第44-47页 |
·全长Brpf1和Brpf2的扩增 | 第47-48页 |
·PCR产物的凝胶回收 | 第48-49页 |
·Brpf1和Brpf2纯蛋白的体外表达 | 第49页 |
·SDS-PAGE | 第49-51页 |
·生物信息学分析 | 第51页 |
4 实验结果 | 第51-65页 |
·Brpf2的鉴定及Genbank登录 | 第51-55页 |
·Brpf1和Brpf2转录图谱的确定 | 第55-57页 |
·Brpf1和Brpf2的生物信息学预测 | 第57-63页 |
·Brpf1和Brpf2纯蛋白的获得 | 第63-65页 |
5 讨论 | 第65-67页 |
第三章 Brpf1和Brpf2蛋白与Rhox5蛋白间的相互作用 | 第67-87页 |
1. 前言 | 第67页 |
2. 实验仪器与材料 | 第67-70页 |
·主要仪器 | 第67页 |
·主要试剂及耗材 | 第67-68页 |
·试剂配置 | 第68-70页 |
3. 实验方法 | 第70-72页 |
·细菌质粒的抽提 | 第70页 |
·PCR产物的切胶回收 | 第70页 |
·PCR的清洁 | 第70页 |
·质粒的CaCl_2转化 | 第70-71页 |
·酵母的LiAc转化 | 第71-72页 |
·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第72页 |
·ST-pull down实验 | 第72页 |
4. 实验结果 | 第72-82页 |
·pGBKT7-Brpf2的构建及鉴定 | 第72-74页 |
·Brpf2与Rhox5间的相互作用鉴定 | 第74-77页 |
·pGBKT7-Brpf1和pGADT7-Brpf1的构建及鉴定 | 第77-79页 |
·Brpf1与Rhox5间的相互作用鉴定 | 第79-82页 |
5. 讨论 | 第82-87页 |
第四章 Brpf1及Brpf2与Rhox5蛋白结合的关键结构 | 第87-102页 |
1. 前言 | 第87页 |
2. 实验仪器与材料 | 第87-88页 |
3. 实验方法 | 第88-90页 |
·截短型Brpf2突变体的获得 | 第88-89页 |
·酵母双杂交实验所需质粒的构建 | 第89页 |
·酵母双杂交实验的设计 | 第89-90页 |
·体外的GST-pull down实验 | 第90页 |
4 实验结果 | 第90-100页 |
·Brpf2截短型突变体的扩增 | 第90-92页 |
·酵母双杂交质粒的鉴定 | 第92-94页 |
·Brpf1和Brpf2与Rhox5相互作用的关键结构 | 第94-95页 |
·Rhox5蛋白与Brpf2相互作用的关键结构 | 第95-97页 |
·GST-Rhox、GST-Rhox 5N和GST-Rhox 5C融合蛋白的表达和小批量纯化 | 第97-98页 |
·体外的GST-pull down实验验证Brpf1、Brpf2与Rhox5蛋白结合的关键结构 | 第98-100页 |
5 讨论 | 第100-102页 |
第五章 论文小结与展望 | 第102-106页 |
附录 | 第106-126页 |
缩写词中英文对照 | 第126-128页 |
致谢 | 第128-129页 |
参考文献 | 第129-136页 |