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Brpf1及其新型转录本Brpf2与Rhox5蛋白间的功能性相互作用研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
目录第10-13页
第一章 前言第13-34页
 1. 染色质调控第13-14页
 2. 溴结构域(Bromodomain)的研究进展第14-23页
   ·Bromodomain的发现第14页
   ·Bromodomain的一级结构第14-15页
   ·Bromodomain的空间结构第15-17页
   ·人bromodomain家族第17-18页
   ·与bromodomain相关的结构域第18-19页
   ·Bromodomain的功能第19-23页
 3. Brpf1蛋白研究进展第23-24页
   ·Brpf1基因的发现第23页
   ·Brpf1蛋白的功能第23-24页
 4. Rhox5蛋白研究进展第24-32页
   ·同源异型框基因家族第24-26页
   ·Rhox基因簇第26-27页
   ·Rhox5基因及其表达模式第27-28页
   ·Rhox5基因表达的调控第28-30页
   ·Rhox5的表观遗传调控第30页
   ·Rhox5靶向的基因第30-31页
   ·与Rhox5蛋白相互作用的蛋白第31-32页
 5. 本研究的意义、创新性和目标第32-34页
第二章 Brpf1及其新型转录木Brpf2的鉴定及表达谱分析第34-67页
 1. 前言第34页
 2. 实验仪器与材料第34-39页
   ·主要仪器第34-35页
   ·主要试剂及耗材第35-36页
   ·试剂配置第36-39页
 3. 实验方法第39-51页
   ·酵母细胞中质粒的抽提第39-40页
   ·电转化第40页
   ·大肠杆菌中质粒的抽提第40-41页
   ·小鼠各组织总RNA的抽提第41-42页
   ·Rr-PCR第42-44页
   ·Northern Blotting第44-47页
   ·全长Brpf1和Brpf2的扩增第47-48页
   ·PCR产物的凝胶回收第48-49页
   ·Brpf1和Brpf2纯蛋白的体外表达第49页
   ·SDS-PAGE第49-51页
   ·生物信息学分析第51页
 4 实验结果第51-65页
   ·Brpf2的鉴定及Genbank登录第51-55页
   ·Brpf1和Brpf2转录图谱的确定第55-57页
   ·Brpf1和Brpf2的生物信息学预测第57-63页
   ·Brpf1和Brpf2纯蛋白的获得第63-65页
 5 讨论第65-67页
第三章 Brpf1和Brpf2蛋白与Rhox5蛋白间的相互作用第67-87页
 1. 前言第67页
 2. 实验仪器与材料第67-70页
   ·主要仪器第67页
   ·主要试剂及耗材第67-68页
   ·试剂配置第68-70页
 3. 实验方法第70-72页
   ·细菌质粒的抽提第70页
   ·PCR产物的切胶回收第70页
   ·PCR的清洁第70页
   ·质粒的CaCl_2转化第70-71页
   ·酵母的LiAc转化第71-72页
   ·β-半乳糖苷酶活性检测第72页
   ·ST-pull down实验第72页
 4. 实验结果第72-82页
   ·pGBKT7-Brpf2的构建及鉴定第72-74页
   ·Brpf2与Rhox5间的相互作用鉴定第74-77页
   ·pGBKT7-Brpf1和pGADT7-Brpf1的构建及鉴定第77-79页
   ·Brpf1与Rhox5间的相互作用鉴定第79-82页
 5. 讨论第82-87页
第四章 Brpf1及Brpf2与Rhox5蛋白结合的关键结构第87-102页
 1. 前言第87页
 2. 实验仪器与材料第87-88页
 3. 实验方法第88-90页
   ·截短型Brpf2突变体的获得第88-89页
   ·酵母双杂交实验所需质粒的构建第89页
   ·酵母双杂交实验的设计第89-90页
   ·体外的GST-pull down实验第90页
 4 实验结果第90-100页
   ·Brpf2截短型突变体的扩增第90-92页
   ·酵母双杂交质粒的鉴定第92-94页
   ·Brpf1和Brpf2与Rhox5相互作用的关键结构第94-95页
   ·Rhox5蛋白与Brpf2相互作用的关键结构第95-97页
   ·GST-Rhox、GST-Rhox 5N和GST-Rhox 5C融合蛋白的表达和小批量纯化第97-98页
   ·体外的GST-pull down实验验证Brpf1、Brpf2与Rhox5蛋白结合的关键结构第98-100页
 5 讨论第100-102页
第五章 论文小结与展望第102-106页
附录第106-126页
缩写词中英文对照第126-128页
致谢第128-129页
参考文献第129-136页

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