| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-29页 |
| ·芪类次生代谢产物及其生物合成途径 | 第15-18页 |
| ·芪类次生代谢产物的种类和分布 | 第15页 |
| ·芪类次生代谢产物的生物活性 | 第15-17页 |
| ·芪类次生代谢产物的生物合成途径 | 第17-18页 |
| ·芪合酶基因的研究进展 | 第18-23页 |
| ·芪合酶基因的结构特征和功能 | 第18-19页 |
| ·芪合酶基因的表达调控 | 第19页 |
| ·芪合酶基因的微生物工程研究 | 第19-20页 |
| ·芪合酶基因转化植物的研究 | 第20-23页 |
| ·何首乌中的芪类次生代谢产物 | 第23-26页 |
| ·何首乌概述 | 第23-24页 |
| ·何首乌的化学成分 | 第24-25页 |
| ·二苯乙烯苷的药理研究及临床应用 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| ·本课题的研究目标、内容和技术路线 | 第27-29页 |
| ·研究目标 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 何首乌RNA 抽提方法的建立 | 第29-39页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·溶液配制 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·实验器材预处理 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·三种RNA 提取方法的比较 | 第31-32页 |
| ·改良CTAB 法提取何首乌不同组织的RNA | 第32-33页 |
| ·分光光度计法测定RNA 的纯度及浓度 | 第33页 |
| ·RT-PCR 法检验RNA 的质量 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·三种方法提取RNA 的比较 | 第34页 |
| ·改良CTAB 法提取的RNA | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 法检验RNA 的完整性 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 何首乌中芪合酶基因的克隆和序列分析 | 第39-58页 |
| ·材料和试剂 | 第39-41页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·Southern blot 溶液的配制 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·RNA 和DNA 的提取 | 第41页 |
| ·反转录 | 第41页 |
| ·何首乌中STS 基因保守序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·RACE 技术克隆FmSTS 的全长cDNA 序列 | 第42-45页 |
| ·FmSTS 基因组全长序列的克隆 | 第45页 |
| ·Southern blot 分析FmSTS 基因的家族成员 | 第45-47页 |
| ·生物信息学分析 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-55页 |
| ·FmSTS cDNA 保守序列及全长序列的分析 | 第48页 |
| ·FmSTS 基因组全长序列的分析 | 第48-50页 |
| ·FmSTS 推导的氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
| ·FmSTS 蛋白的高级结构预测 | 第52-54页 |
| ·系统发育分析 | 第54-55页 |
| ·FmSTS 基因的Southern blot 分析 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 FmSTS 基因的原核表达及功能鉴定 | 第58-76页 |
| ·材料和试剂 | 第58-61页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·溶液配制 | 第59-60页 |
| ·仪器 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-66页 |
| ·FmSTS 基因片段的扩增 | 第61页 |
| ·表达质粒pET-FmSTS 的构建 | 第61-62页 |
| ·FmSTS 在E.coli BL21 中的表达 | 第62-63页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的溶解性鉴定 | 第63页 |
| ·可溶性FmSTS 蛋白诱导表达条件的优化 | 第63-64页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的分离纯化 | 第64-65页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的催化反应 | 第65页 |
| ·重组蛋白的Western blot 鉴定 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·FmSTS 基因的PCR 扩增及亚克隆 | 第66页 |
| ·大肠杆菌表达质粒的构建 | 第66-68页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的诱导表达 | 第68页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的可溶性分析 | 第68-69页 |
| ·可溶性FmSTS 蛋白的获得 | 第69-70页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的分离纯化 | 第70-71页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的功能鉴定 | 第71-72页 |
| ·重组FmSTS 蛋白的Western blot 分析 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 第五章 FmSTS 基因转化拟南芥 | 第76-91页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第76-77页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·主要试剂 | 第77页 |
| ·仪器 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-81页 |
| ·植物表达载体pCAM-Fm STS 的构建 | 第77-78页 |
| ·农杆菌的转化及鉴定 | 第78-79页 |
| ·农杆菌介导的花序浸泡法转化拟南芥 | 第79-80页 |
| ·转基因拟南芥植株的筛选 | 第80页 |
| ·T2 代转基因拟南芥植株的化学成分分析 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-88页 |
| ·植物表达质粒pCAM-Fm STS 的分析 | 第81-82页 |
| ·农杆菌pCAM-Fm STS/EHA105 的鉴定 | 第82页 |
| ·转基因拟南芥的筛选和鉴定 | 第82-85页 |
| ·T2 代转基因拟南芥植株的化学成分分析 | 第85-87页 |
| ·转基因植株中白藜芦醇苷的定量分析 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·本章小结 | 第90-91页 |
| 第六章 FmSTS 组织表达与二苯乙烯苷含量分布的相关性分析 | 第91-100页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第91-92页 |
| ·实验材料 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·溶液配制 | 第91-92页 |
| ·仪器 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-94页 |
| ·Northern blot 分析FmSTS 在何首乌不同组织中的表达 | 第92-93页 |
| ·HPLC 测定不同组织中二苯乙烯苷的含量分布 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-98页 |
| ·FmSTS 基因的组织表达模式 | 第94页 |
| ·何首乌不同组织中二苯乙烯苷的分布 | 第94-97页 |
| ·FmSTS 组织表达与二苯乙烯苷含量分布的相关性分析 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| ·本章小结 | 第99-100页 |
| 结论与展望 | 第100-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 附录Ⅰ 缩写词(Abbreviation) | 第116-119页 |
| 附录Ⅱ FmSTS 基因及蛋白序列 | 第119-121页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附录 | 第123页 |
