| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩写对照表 | 第10-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| ·前脂肪细胞分化的研究进展 | 第16-18页 |
| ·研究脂肪细胞分化的重要意义 | 第16页 |
| ·脂肪细胞的起源及功能 | 第16-17页 |
| ·脂肪细胞分化过程 | 第17-18页 |
| ·RAS 在脂肪组织中的表达 | 第18-19页 |
| ·国内外研究现状及意义 | 第19-22页 |
| ·国内外研究现状及分析 | 第19-20页 |
| ·本论文主要研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 3T3-L1 鼠前脂肪细胞的培养及诱导分化 | 第22-35页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·实验细胞株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞培养及传代 | 第25-26页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化及形态学观察 | 第26页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞中脂质含量测定 | 第26-27页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞GPDH 活性测定 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞生长曲线 | 第28页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞分化前后形态学观察 | 第28-30页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞分化过程中胞浆内脂质含量的测定 | 第30页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞分化过程中GPDH 活性的测定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-34页 |
| ·前脂肪细胞系的选择 | 第31-32页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞生长规律及分化过程中形态特性 | 第32页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞分化过程中胞内脂质含量的变化 | 第32-33页 |
| ·3T3-L1 前脂肪细胞分化过程中GPDH 活性的变化 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 靶向 AGT 的 si RNA 表达载体的构建 | 第35-44页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·实验溶液配置 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·psiRNAT-U6.1/Neo 载体线性化及回收 | 第36-37页 |
| ·靶向AGT 的沉默质粒的设计与构建 | 第37页 |
| ·寡聚核苷酸退火 | 第37-38页 |
| ·载体与siRNA 双链连接 | 第38页 |
| ·E.coli TOP10 感受态细胞的制备及转化 | 第38页 |
| ·高纯度Psi-AGT 质粒的抽提 | 第38-39页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·质粒酶切分析结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·shRNA 的转录及加工过程 | 第42页 |
| ·使用人源U6 启动子转录shRNA 的注意事项 | 第42-43页 |
| ·shRNA 序列的选择标准 | 第43页 |
| ·psiRNA T-U6.1/Neo 载体的选择 | 第43-44页 |
| 第四章 AGT 干扰质粒对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响 | 第44-63页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·主要溶液配制 | 第45-46页 |
| ·3T3-L1 鼠前脂肪细胞培养 | 第46页 |
| ·3T3-L1 鼠前脂肪细胞瞬时转染 | 第46-47页 |
| ·G418 筛选稳定转染的3T3-L1 细胞 | 第47页 |
| ·转染后AGT-mRNA 沉默效果检测 | 第47-48页 |
| ·RNA 电泳 | 第48页 |
| ·逆转录 | 第48-49页 |
| ·Real-Time PCR 反应 | 第49页 |
| ·Real Time-PCR 条件 | 第49页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第50-51页 |
| ·染后油红O 染色检测脂质含量变化差异 | 第51页 |
| ·转染后GPDH 酶活性变化差异 | 第51-52页 |
| ·统计学分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-58页 |
| ·脂质体转染优化及G418 筛选 | 第52-54页 |
| ·mRNA 完整性检验 | 第54页 |
| ·Real-time RT-PCR 结果 | 第54-55页 |
| ·转录水平的沉默效率 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第56页 |
| ·沉默后3T3-L1 细胞分化过程中脂质积累的变化 | 第56-58页 |
| ·沉默后3T3-L1 细胞分化过程中GPDH 酶活性的变化 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 结论、创新与展望 | 第63-65页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 本论文的创新 | 第64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
