| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 植物自交不亲和性及其普遍性 | 第13-14页 |
| 2 国内外梨自交不亲和性的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 植物基因启动子的结构特征及分类 | 第16-21页 |
| ·启动子的一般结构特征 | 第16-19页 |
| ·核心启动子组件 | 第17-18页 |
| ·上游启动子元件 | 第18-19页 |
| ·植物启动子的分类和应用 | 第19-21页 |
| ·组成型启动子 | 第19-20页 |
| ·组织特异型启动子 | 第20-21页 |
| ·诱导型启动子 | 第21页 |
| 4 植物基因启动子分离克隆方法 | 第21-26页 |
| ·通过构建及筛选基因组文库来克隆启动子 | 第21-22页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第22-26页 |
| ·利用常规PCR技术克隆启动子 | 第22页 |
| ·利用改进的PCR技术克隆启动子 | 第22-26页 |
| 5 植物遗传转化研究进展 | 第26-28页 |
| ·载体介导转化法 | 第26-27页 |
| ·直接遗传转化方法 | 第27-28页 |
| ·基因枪法 | 第27页 |
| ·电激法 | 第27-28页 |
| ·PEG法 | 第28页 |
| ·种质系统转化法 | 第28页 |
| 6 S-RNase基因启动子国内外研究现状 | 第28-30页 |
| 7 本研究的目的、意义及研究方案 | 第30-33页 |
| ·本研究的目的意义 | 第30-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 第二部分 论文正文 | 第33-77页 |
| 1 梨S-RNase基因启动子的扩增及功能分析 | 第33-67页 |
| ·材料与方法 | 第33-46页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌株与试剂 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-46页 |
| ·梨基因组总DNA提取 | 第34页 |
| ·梨S-RNase基因5'端上游侧翼序列的TAIL-PCR扩增及验证 | 第34-37页 |
| ·TAIL-PCR产物的回收及与pMD18-T克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组子的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·5'端上游侧翼序列网上BLAST及功能元件分析 | 第39页 |
| ·蔷薇科启动子序列系统发育树的构建 | 第39页 |
| ·砂梨S_(12)-RNase基因启动子5'端缺失引物设计 | 第39-40页 |
| ·植物表达载体pBI101.2 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增启动子缺失DNA模板 | 第41-42页 |
| ·砂梨S_(12)-RNase基因启动子缺失片段PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的提取 | 第42页 |
| ·缺失表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·电击转化法 | 第44页 |
| ·农杆菌Floral Dip法转化拟南芥 | 第44-45页 |
| ·拟南芥转基因纯合系的筛选 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-65页 |
| ·梨基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·梨S-RNase基因5'端上游侧翼序列TAIL-PCR扩增 | 第47-49页 |
| ·梨S-RNase基因5'端上游侧翼序列的比对分析 | 第49-54页 |
| ·S_(13)-、S_(12)-、S_(21)-RNase基因启动子功能元件预测 | 第54-58页 |
| ·蔷薇科S-RNase基因启动子系统进化分析 | 第58-59页 |
| ·砂梨S_(12)-RNase基因启动子5'端缺失片段的PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·砂梨S_(12)-RNase基因启动子5'端缺失植物表达载体构建 | 第60-62页 |
| ·阳性农杆菌菌株的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| ·转基因植株T1代筛选 | 第63页 |
| ·PCR鉴定转基因拟南芥植株 | 第63-64页 |
| ·拟南芥转基因纯合系的筛选结果 | 第64-65页 |
| ·小结与讨论 | 第65-67页 |
| 2 植物雌性不育及雌雄不育植物表达载体的构建 | 第67-77页 |
| ·材料与方法 | 第68-72页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌株与试剂 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-72页 |
| ·西兰花基因组总DNA提取 | 第68页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| ·花药绒毡层特异表达基因BoA9启动子的扩增 | 第69页 |
| ·诱导不育的半胱氨酸蛋白酶基因CysP1的扩增 | 第69页 |
| ·雌性不育植物表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·雄性不育中间载体的构建 | 第70-71页 |
| ·雌雄不育植物表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-76页 |
| ·花药绒毡层特异表达基因BoA9启动子PCR扩增 | 第72-73页 |
| ·诱导不育的半胱氨酸蛋白酶基因CysP1的PCR扩增 | 第73-74页 |
| ·雌性不育植物表达载体PpS_(12)pro-CysP1-pBI101.2的构建 | 第74页 |
| ·雄性不育中间载体的构建 | 第74-75页 |
| ·雌雄不育植物表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·小结与讨论 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 创新点 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间的主要学术成果 | 第91页 |
