| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-28页 |
| ·细菌靶向治疗肿瘤的概述 | 第11-18页 |
| ·细菌靶向治疗肿瘤的研究进展 | 第11-13页 |
| ·细菌靶向治疗肿瘤的机制 | 第13-14页 |
| ·细菌靶向治疗肿瘤的优势 | 第14-15页 |
| ·细菌靶向治疗肿瘤的策略 | 第15-17页 |
| ·益生型大肠杆菌Nissle1917 | 第17页 |
| ·大肠杆菌Nissle1917作为肿瘤靶向治疗载体的优势 | 第17-18页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统 | 第18-21页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统的概念和原理 | 第18-19页 |
| ·常用的营养缺陷标志基因 | 第19-20页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统的应用 | 第20-21页 |
| ·Red/ET同源重组 | 第21-27页 |
| ·Red/ET同源重组的原理 | 第22页 |
| ·Red/ET同源重组的优点 | 第22-23页 |
| ·Red/ET同源重组的应用 | 第23-27页 |
| ·立题依据和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-44页 |
| ·材料 | 第28-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第28-29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·培养基和抗生素 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·反应体系 | 第31-32页 |
| ·仪器与设备 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-44页 |
| ·大肠杆菌Nissle1917glnA基因缺失突变株的构建 | 第33-34页 |
| ·Red/ET重组替换glnA基因 | 第34页 |
| ·位点特异性重组去除抗性筛选标记基因 | 第34-35页 |
| ·互补表达质粒pGB-Ptet-glnA的构建及转化 | 第35-37页 |
| ·互补菌株EcN △glnA(pGB-Ptet-glnA)生长曲线及质粒稳定性 | 第37页 |
| ·互补菌株肿瘤靶向性试验 | 第37页 |
| ·pelB-azurin基因片段的克隆及诱导表达 | 第37-39页 |
| ·azurin基因的克隆表达及抗体制备 | 第39-43页 |
| ·Western blotting分析 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-52页 |
| ·E.coli Nissle1917 △glnA的构建 | 第44-45页 |
| ·EcN glnA基因的克隆及测序 | 第44页 |
| ·IoxP-Kan抗性筛选盒的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·EcN △glnA的鉴定 | 第45页 |
| ·互补表达质粒pGB-Ptet-glnA的构建 | 第45-46页 |
| ·glnA-Kan打靶片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·互补质粒pGB-Ptet-glnA的鉴定 | 第46页 |
| ·EcN △glnA(pGB-Ptet-glnA)的生长曲线和质粒稳定性 | 第46-48页 |
| ·互补菌生长曲线 | 第46-47页 |
| ·互补质粒的稳定性试验 | 第47-48页 |
| ·互补菌肿瘤靶向性验证 | 第48-49页 |
| ·azurin蛋白的表达纯化及抗体制备 | 第49-50页 |
| ·azu基因的克隆和诱导表达 | 第49页 |
| ·azurin蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| ·外源azurin基因的分泌表达及western blotting检测 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-70页 |
| 硕士期间撰写和发表的与本课题相关的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
