| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1. 引言 | 第13-31页 |
| ·放线菌概述 | 第13-14页 |
| ·放线菌次生代谢产物研究 | 第14-16页 |
| ·抗生素生物合成途径的研究进展 | 第16-24页 |
| ·聚酮抗生素生物合成途径研究 | 第16-21页 |
| ·聚肽抗生素生物合成途径研究 | 第21-22页 |
| ·杂合PKS-NRPS的研究进展 | 第22-24页 |
| ·利迪链菌素生物合成研究现状及立题依据与意义 | 第24-27页 |
| ·多杀菌素研究进展 | 第27-29页 |
| ·脱氧核糖核酸内切酶研究现状与立题依据与意义 | 第29-31页 |
| 2. 材料与方法 | 第31-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第31-32页 |
| ·培养基与抗生素 | 第32-33页 |
| ·试剂与引物 | 第33-35页 |
| ·放线菌总DNA提取试剂 | 第33页 |
| ·质粒提取试剂 | 第33-34页 |
| ·蛋白电泳试剂 | 第34页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第34页 |
| ·蛋白测活试剂 | 第34页 |
| ·引物 | 第34-35页 |
| ·仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-43页 |
| ·放线菌总DNA的制备 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增 | 第37页 |
| ·DNA连接 | 第37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第38页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第38页 |
| ·利迪链霉菌抗性敏感试验 | 第38-39页 |
| ·利迪链霉菌的孢子制备 | 第39页 |
| ·接合转移 | 第39-40页 |
| ·同源重组突变株获得 | 第40页 |
| ·蛋白表达及纯化 | 第40-42页 |
| ·核酸酶活性的测定 | 第42-43页 |
| 3. 结果与分析 | 第43-69页 |
| ·利迪链霉菌抗性敏感实验与接合转移 | 第43-44页 |
| ·利迪链霉菌抗性敏感实验 | 第43页 |
| ·接合转移 | 第43-44页 |
| ·细胞色素P450氧化酶1(P450-1)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第44-48页 |
| ·p450-1基因中断重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·p450-1基因中断株ΔP450-1的筛选和鉴定 | 第45-47页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第47-48页 |
| ·细胞色素P450氧化酶2(P450-2)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第48-50页 |
| ·p450-2基因中断重组质粒的构建 | 第48页 |
| ·p450-2基因中断株ΔP450-2的筛选和鉴定 | 第48-50页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第50页 |
| ·聚酮合成酶(PKS)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第50-53页 |
| ·pks基因中断重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·pks基因中断株APKS的筛选和鉴定 | 第51页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第51-53页 |
| ·转氨酶(Adtf)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第53-56页 |
| ·adtf基因中断重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·adtf基因中断株ΔADTF的筛选和鉴定 | 第54-55页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第55-56页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶(Idha)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第56-59页 |
| ·idha基因中断重组质粒的构建 | 第56-58页 |
| ·idha基因中断株ΔIDHA的筛选和鉴定 | 第58-59页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第59页 |
| ·2,3-己糖脱氢酶(Hdt)与利迪链菌素生物合成相关性的研究 | 第59-62页 |
| ·hdt基因中断重组质粒的构建 | 第59-61页 |
| ·hdt基因中断株AHDT的筛选和鉴定 | 第61页 |
| ·HPLC检测发酵产物 | 第61-62页 |
| ·exo基因的克隆、表达与蛋白测活 | 第62-69页 |
| ·exo-Ⅰ基因表达载体的构建 | 第63页 |
| ·exo-Ⅰ的表达、Exo-Ⅰ纯化与复性 | 第63-65页 |
| ·Exo-Ⅰ的活性测定 | 第65-66页 |
| ·exo-Ⅱ基因表达载体的构建 | 第66页 |
| ·exo-Ⅱ的表达、Exo-Ⅱ的纯化 | 第66-68页 |
| ·Exo-Ⅱ的活性测定 | 第68-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-72页 |
| ·两个细胞色素P450氧化酶基因与利迪链菌素生物合成的相关性 | 第69-70页 |
| ·其他四个基因与利迪链菌素生物合成的相关性 | 第70页 |
| ·单交换同源重组获得中断突变株 | 第70-71页 |
| ·来源于刺糖多孢菌的两个脱氧核糖核苷酸内切酶 | 第71-72页 |
| 结语 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 本论文感谢以下科技项目的资助 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
