| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.1 双孢蘑菇简介 | 第9-13页 |
| 1.1.1 双孢蘑菇的生活史与有性生殖系统 | 第9-10页 |
| 1.1.2 双孢蘑菇子实体形态特征 | 第10页 |
| 1.1.3 双孢蘑菇的营养价值 | 第10页 |
| 1.1.4 双孢蘑菇的栽培 | 第10-11页 |
| 1.1.5 双孢蘑菇的贮藏 | 第11-13页 |
| 1.2 多酚氧化酶与PPO基因研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 多酚氧化酶概况 | 第13-14页 |
| 1.2.2 多酚氧化酶酶学性质 | 第14页 |
| 1.2.3 多酚氧化酶基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 分子生物学技术在食用菌育种方面的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 .主要遗传转化技术 | 第15-17页 |
| 1.3.2 .启动子技术和筛选标记技术 | 第17页 |
| 1.3.3 .DNA分子标记 | 第17页 |
| 1.3.4 .反义RNA技术 | 第17-18页 |
| 1.3.5 .CRISPR/Cas9系统基因组定点编辑技术 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 农杆菌介导双孢蘑菇遗传转化 | 第20-28页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第20页 |
| 2.2 试验主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 试验方法 | 第21-24页 |
| 2.3.1 制备农杆菌感受态细胞 | 第21页 |
| 2.3.2 冻融法转化农杆菌感受态 | 第21页 |
| 2.3.3 农杆菌介导双孢蘑菇子实体的转化 | 第21-22页 |
| 2.3.4 农杆转基因双孢蘑菇抗性菌丝筛选 | 第22页 |
| 2.3.5 抗潮霉素阳性转化子鉴定 | 第22-24页 |
| 2.4 结果分析 | 第24-26页 |
| 2.4.1 农杆菌检测分析 | 第24页 |
| 2.4.2 农杆菌介导双孢蘑菇子实体的遗传转化分析 | 第24-25页 |
| 2.4.3 抗潮霉素阳性转化子鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第26-28页 |
| 2.5.1 遗传转化 | 第26页 |
| 2.5.2 转化侵染组织的选择 | 第26-28页 |
| 3 转基因双孢蘑菇出菇栽培 | 第28-35页 |
| 3.1 供试菌株 | 第28页 |
| 3.2 菌种制作 | 第28-29页 |
| 3.2.1 菌种活化 | 第28页 |
| 3.2.2 一级菌种试管种制作 | 第28页 |
| 3.2.3 二级菌种麦粒菌种制作 | 第28-29页 |
| 3.3 出菇实验 | 第29-30页 |
| 3.3.1 试验设计 | 第29-30页 |
| 3.3.2 播种与覆土 | 第30页 |
| 3.4 结果分析 | 第30-33页 |
| 3.4.1 转基因双孢蘑菇转化子出菇 | 第30页 |
| 3.4.2 转基因双孢蘑菇产量统计分析 | 第30-31页 |
| 3.4.3 转基因双孢蘑菇子实体特征特性分析 | 第31-33页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第33-35页 |
| 3.5.1 麦粒种制作的关键技术 | 第33页 |
| 3.5.2 转基因双孢蘑菇转化子经出菇 | 第33-35页 |
| 4 PPO基因家族在转基因双孢蘑菇的表达分析 | 第35-45页 |
| 4.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 材料 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试验试剂 | 第35页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第35-36页 |
| 4.2 试验方法 | 第36-39页 |
| 4.2.1 转基因双孢蘑菇PPO基因家族转录水平上表达 | 第36-39页 |
| 4.2.2 转基因双孢蘑菇PPO活性测定 | 第39页 |
| 4.3 结果分析 | 第39-42页 |
| 4.3.1 RNA质量检测 | 第39-40页 |
| 4.3.2 内参基因引物特异性分析 | 第40-41页 |
| 4.3.3 转基因双孢蘑菇PPO基因家族转录水平上表达分析 | 第41-42页 |
| 4.3.4 转基因双孢蘑菇多酚氧化酶活性分析 | 第42页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第42-45页 |
| 5 转基因双孢蘑菇抗褐变性状研究 | 第45-52页 |
| 5.1 试验材料 | 第45页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第45页 |
| 5.1.2 试验主要仪器 | 第45页 |
| 5.2 测定项目与方法 | 第45-46页 |
| 5.2.1 硬度 | 第45页 |
| 5.2.2 菇盖白度的测定 | 第45-46页 |
| 5.2.3 子实体切褐化测定 | 第46页 |
| 5.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 5.3.1 转基因双孢蘑菇硬度分析 | 第46-48页 |
| 5.3.2 菇盖白度的分析 | 第48-49页 |
| 5.3.3 子实体切面褐化分析 | 第49-50页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
