摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
第一章 研究背景 | 第14-23页 |
1.病毒严重危害人类的生命健康 | 第14-16页 |
2.干扰素和干扰素诱导基因在病毒感染中发挥重要作用 | 第16-17页 |
3.干扰素相关信号通路受到机体的精确调控 | 第17-18页 |
4.GPCR对于细胞内信号转导具有重要的调控作用 | 第18-19页 |
5.GPCR在病毒感染中发挥重要作用 | 第19-20页 |
6.GPR171目前的研究进展 | 第20-21页 |
7.课题研究目的以及意义 | 第21-23页 |
第二章 实验材料与方法 | 第23-49页 |
1.实验材料 | 第23-28页 |
1.1.实验小鼠及细胞 | 第23页 |
1.2.实验试剂 | 第23-24页 |
1.3.实验器材及耗材 | 第24-25页 |
1.4.试剂配制 | 第25-27页 |
1.5.引物序列 | 第27-28页 |
2.实验方法 | 第28-48页 |
2.1.荧光定量PCR | 第28-30页 |
2.2.基因敲除技术(CRISPR/cas9) | 第30-38页 |
2.3.VSV病毒扩增 | 第38-39页 |
2.4.病毒滴度检测 | 第39页 |
2.5.免疫印迹法 (Western blot) | 第39-41页 |
2.6.小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)的提取 | 第41-42页 |
2.7.小鼠腹腔来源巨噬细胞(PEM)的提取 | 第42-43页 |
2.8.小鼠嗅球VSV感染模型 | 第43页 |
2.9.小鼠腹腔VSV感染模型 | 第43页 |
2.10.结晶紫染色 | 第43-44页 |
2.11.L929上清的制备 | 第44页 |
2.12.转染步骤 | 第44-45页 |
2.13.GPR171-sh RNA的构建 | 第45-48页 |
3.统计学分析 | 第48-49页 |
第三章.实验结果和讨论 | 第49-73页 |
第一节. GPR171是干扰素诱导基因 | 第49-55页 |
1.干扰素诱导GPR171的表达 | 第49-51页 |
2.干扰素通过NF-κB信号通路诱导GPR171表达上调 | 第51-53页 |
3.病毒感染促进了GPR171的表达 | 第53-55页 |
第二节. 过表达GPR171及其配体Biglen促进病毒的复制 | 第55-61页 |
1.过表达GPR171能促进VSV的复制 | 第56-58页 |
2.过表达GPR171能促进HSV和NDV的复制 | 第58-59页 |
3.GPR171配体Biglen促进病毒的复制 | 第59-60页 |
4.干扰GPR171的表达下调VSV的复制 | 第60-61页 |
第三节. GPR171敲除后病毒的复制减少 | 第61-66页 |
1.CRISPR/cas9技术构建GPR171敲除小鼠 | 第61-62页 |
2.巨噬细胞敲除GPR171降低病毒复制 | 第62-63页 |
3.Biglen通过GPR171促进病毒的复制 | 第63-64页 |
4.VSV腹腔感染模型中,GPR171敲除小鼠VSV的表达量减少 | 第64-65页 |
5.VSV嗅球感染模型中,GPR171敲除的小鼠嗅球中的VSV量明显减少 | 第65-66页 |
第四节. GPR171通过影响干扰素信号通路来促进病毒的复制 | 第66-70页 |
1.GPR171不影响干扰素的表达 | 第66-67页 |
2.GPR171通过抑制干扰素下游的干扰素诱导基因的表达来达到促进病毒复制 | 第67-70页 |
第五节:结论与展望 | 第70-73页 |
附录Ⅰ 缩略词 | 第73-75页 |
附录Ⅱ 攻读硕士学位期间科研工作成果 | 第75-76页 |
科研工作成果 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-82页 |
致谢 | 第82页 |