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内吞相关蛋白调控AngⅡ诱导心肌肥大作用机制的研究

提要第1-11页
前言第11-13页
第1章 综述第13-33页
   ·心室重塑与心肌细胞肥大第13-16页
     ·心肌细胞肥大第14页
     ·细胞肥大与细胞周期的关系第14-15页
     ·心肌细胞肥大与CI~-通道ClC-2 的关系第15-16页
   ·肾素-血管紧张素系统第16-21页
     ·血管紧张素II第16-19页
     ·血管紧张素受体第19-20页
     ·肾素第20页
     ·血管紧张素转换酶第20-21页
   ·GPCRS 的内吞第21-23页
   ·AT1 受体内吞机制第23-29页
     ·包被和非包被小囊泡的作用第23-25页
     ·AT1 受体内吞的分子基础第25-26页
     ·衔接蛋白的作用第26-28页
     ·配体和受体复合物在内吞后的命运第28-29页
   ·AT1 受体内吞可能存在的功能第29-33页
第2章 材料和方法第33-46页
   ·实验材料第33-36页
     ·主要试剂第33页
     ·主要仪器第33-34页
     ·质粒和菌株第34页
     ·细胞株第34页
     ·主要试剂的配制第34-36页
   ·实验方法第36-45页
     ·冻存细胞的复苏第36页
     ·细胞传代第36-37页
     ·细胞冻存第37页
     ·MTT 检测法第37页
     ·流式细胞仪检测第37-38页
     ·Western blot 检测p38、phospho-p38、p65 和AP2 的蛋白表达第38-40页
     ·pSilencer~(TM)ne03.1-H1-AP2 siRNA 载体构建第40-42页
     ·siRNA 重组质粒转染及沉默效应检测第42-44页
     ·细胞免疫组织化学染色及激光共聚焦照相第44-45页
   ·统计学处理第45-46页
第3章 结果第46-70页
   ·内吞在ANG II 诱导心肌细胞肥大信号转导途径中的作用第46-55页
     ·内吞抑制剂苯胂氧化物(PAO)对大鼠心肌细胞(H9C2)生存率的影响第46页
     ·AT1 受体拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对H9C2 细胞生存率的影响第46-47页
     ·PAO 和candesartan 对Ang II 诱导的H9C2 细胞体积改变的影响第47-48页
     ·Candesartan 对AngII 诱导的p38 磷酸化的影响第48-49页
     ·PAO 对AngII 诱导的p38 磷酸化的影响第49-50页
     ·Candesartan 对AngII 诱导的NF-κB(p65)核转移的影响第50-51页
     ·PAO 对AngII 诱导的NF-κB(p65)核转移的影响第51-52页
     ·PAO 与candesartan 对AngII 诱导的H9C2 细胞周期改变的影响第52-53页
     ·Candesartan 与PAO 对AngII 诱导的ClC-2 表达的作用第53-55页
   ·内吞相关衔接蛋白2 Μ2 亚单位SIRNA 表达载体的构建及其效应第55-61页
     ·衔接蛋白2 μ2 亚单位siRNA 表达载体(pSH15i-AP2)的构建第55-58页
     ·pSH15i-AP2 质粒转染对目的基因和蛋白的沉默效应第58-61页
   ·抑制AP2 的表达对ANGII 介导的AT1-R 内吞及细胞肥大相关信号途径的影响第61-70页
     ·激光共聚焦显微镜观察AngII 的内吞第61-63页
     ·抑制AP2 的表达,观察其对AT1 受体介导的AngII 内吞的影响第63-64页
     ·pSH15i-AP2 plasmid-1 重组质粒转染H9C2 细胞对 Ang II 诱导的H9C2 细胞体积改变的影响第64-65页
     ·pSH15i-AP2 plasmid-1 重组质粒转染H9C2 细胞,观察其对p38 磷酸化的影响第65-66页
     ·pSH15i-AP2 plasmid-1 重组质粒转染H9C2 细胞,观察其对p65 核转移的影响第66-67页
     ·pSH15i-AP2 plasmid-1 重组质粒转染H9C2 细胞对Ang II 诱导的细胞周期改变的影响第67-68页
     ·pSH15i-AP2 plasmid-1 重组质粒转染H9C2 细胞,观察其对ClC-2 表达的影响第68-70页
第4章 讨论第70-76页
结论第76-77页
参考文献第77-91页
攻读博士期间发表文章第91-92页
致谢第92-93页
中文摘要第93-97页
ABSTRACT第97-101页

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