| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 杆状病毒概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 杆状病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 杆状病毒的结构 | 第14-17页 |
| 1.1.3 杆状病毒基因表达 | 第17页 |
| 1.1.4 杆状病毒的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 杆状病毒的生活周期 | 第18-22页 |
| 1.2.1 杆状病毒穿过围食膜的研究 | 第20页 |
| 1.2.2 杆状病毒感染中肠柱状上皮细胞研究 | 第20-21页 |
| 1.2.3 系统感染 | 第21-22页 |
| 1.3 杆状病毒口服感染因子及复合物的研究 | 第22-27页 |
| 1.3.1 口服感染因子的研究 | 第23-26页 |
| 1.3.2 口服感染因子复合物的研究 | 第26页 |
| 1.3.3 口服感染因子PIF5 研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4 本论文的研究内容及意义 | 第27-29页 |
| 第2章 AcMNPV PIF5 的特性研究 | 第29-54页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-38页 |
| 2.1.1 细胞系、昆虫、病毒、载体、菌株及抗体 | 第29-30页 |
| 2.1.2 PIF5 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.1.3 pif5 转录时相和5’RACE及3’RACE | 第30-31页 |
| 2.1.4 PIF5 表达时相 | 第31页 |
| 2.1.5 免疫荧光 | 第31-32页 |
| 2.1.6 pif5 缺失型重组病毒构建 | 第32页 |
| 2.1.7 pif5 回复型重组病毒构建 | 第32-33页 |
| 2.1.8 重组病毒转染及western blot检测 | 第33页 |
| 2.1.9 PIF5 蛋白二硫键检测 | 第33页 |
| 2.1.10 Western blot检测PIF5 是否为AcMNPV的结构蛋白 | 第33-34页 |
| 2.1.11 电镜和免疫电镜观察 | 第34-35页 |
| 2.1.12 一步生长曲线 | 第35-36页 |
| 2.1.13 原位碱解 | 第36页 |
| 2.1.14 qPCR检测基因组拷贝数 | 第36-37页 |
| 2.1.15 口服感染 | 第37-38页 |
| 2.1.16 ODV对 Sf9 细胞的感染 | 第38页 |
| 2.2 结果 | 第38-51页 |
| 2.2.1 PIF5 生物信息学分析 | 第38页 |
| 2.2.2 PIF5 转录时相和表达时相 | 第38-41页 |
| 2.2.3 PIF5 亚细胞定位 | 第41页 |
| 2.2.4 重组病毒构建及检测 | 第41-42页 |
| 2.2.5 PIF5 是病毒的结构蛋白 | 第42-44页 |
| 2.2.6 PIF5 含有分子内二硫键 | 第44-47页 |
| 2.2.7 缺失pif5 并不影响感染性病毒粒子BV的产生 | 第47页 |
| 2.2.8 缺失pif5 并不影响ODV成熟及OB的形态 | 第47-49页 |
| 2.2.9 缺失pif5 并不影响包涵体中ODV的含量 | 第49-51页 |
| 2.2.10 缺失pif5 影响口服感染 | 第51页 |
| 2.2.11 缺失pif5 会降低ODV感染Sf9 细胞的效率 | 第51页 |
| 2.3 讨论 | 第51-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第3章 AcMNPV PIF5 的外源表达及纯化 | 第54-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第54-58页 |
| 3.1.1 菌株、质粒、细胞系、病毒及抗体 | 第54页 |
| 3.1.2 PIF5 蛋白的原核表达及检测 | 第54-56页 |
| 3.1.3 PIF5 蛋白的真核表达 | 第56-57页 |
| 3.1.4 外源表达PIF5 蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 3.1.5 PIF5-P-T1 蛋白纯化方法优化 | 第58页 |
| 3.2 结果 | 第58-64页 |
| 3.2.1 不同截短型PIF5 蛋白的原核表达 | 第58-59页 |
| 3.2.2 原核表达PIF5-P-T1 蛋白的纯化 | 第59-61页 |
| 3.2.3 PIF5-P-T1 蛋白纯化方法的优化 | 第61-63页 |
| 3.2.4 不同截短型PIF5 蛋白的真核表达及稳定表达细胞系的筛选 | 第63页 |
| 3.2.5 真核表达PIF5-E-T1 蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第4章 AcMNPV PIF5 与中肠细胞刷状缘膜囊泡相互作用 | 第67-79页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 4.1.1 昆虫和抗体 | 第67页 |
| 4.1.2 BBMV提取及检测 | 第67-68页 |
| 4.1.3 Far-western blot 实验 | 第68-69页 |
| 4.1.4 Pull-down 实验 | 第69页 |
| 4.1.5 BBMV与 PIF5-P-T1 蛋白共孵育 | 第69页 |
| 4.2 结果 | 第69-76页 |
| 4.2.1 BBMV的提取与检测 | 第69-70页 |
| 4.2.2 外源表达PIF5与BBMV相互作用的far-western blot检测 | 第70-72页 |
| 4.2.3 Pull-down检测 | 第72-75页 |
| 4.2.4 BBMV促进外源表达PIF5-P-T1 蛋白降解 | 第75-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-78页 |
| 4.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第5章 总结与展望 | 第79-81页 |
| 5.1 PIF5 不影响子代病毒BV和 ODV的产生 | 第79页 |
| 5.2 PIF5 影响口服感染及ODV感染Sf9 效率 | 第79-80页 |
| 5.3 外源表达可溶的截短型PIF5 蛋白 | 第80页 |
| 5.4 PIF5-P-T1与BBMV有相互作用 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第95页 |
