| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第16-30页 |
| 1.1 人胚胎干细胞 | 第16页 |
| 1.1.1 人胚胎干细胞的由来 | 第16页 |
| 1.1.2 人胚胎干细胞的研究现状及意义 | 第16页 |
| 1.2 4-羟基壬烯醛(4-HNE)的简述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 HNE的产生 | 第16-17页 |
| 1.2.2 HNE的毒性作用 | 第17-18页 |
| 1.2.3 HNE的代谢 | 第18页 |
| 1.2.4 HNE与疾病 | 第18-19页 |
| 1.3 氧化应激 | 第19-25页 |
| 1.3.1 氧化应激的简述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 氧化应激模型的建立 | 第20页 |
| 1.3.3 ROS主要生成酶——NADPH氧化酶 | 第20-22页 |
| 1.3.4 氧化应激的评价 | 第22-23页 |
| 1.3.5 氧化应激在胚胎干细胞中的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.4 氧化应激与自噬 | 第25-30页 |
| 1.4.1 自噬的简介 | 第25-26页 |
| 1.4.2 氧化应激与自噬的关系 | 第26-29页 |
| 1.4.3 胚胎干细胞中自噬的研究现状 | 第29-30页 |
| 第二章 实验材料 | 第30-37页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第30-37页 |
| 2.1.1 细胞 | 第30页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第30-32页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要溶液配 | 第33-37页 |
| 第三章 实验方法 | 第37-48页 |
| 3.1 细胞培养 | 第37-39页 |
| 3.1.1 细胞的复苏 | 第37页 |
| 3.1.2 细胞的传代 | 第37-38页 |
| 3.1.3 细胞的冻存 | 第38-39页 |
| 3.1.4 细胞计数及种板 | 第39页 |
| 3.1.5 H1/HCE/HUVEC/GES-1细胞的H2O2和HNE处理 | 第39页 |
| 3.1.6 H1/HCE细胞TPA处理 | 第39页 |
| 3.2 CCK-8法测定细胞的活性 | 第39-40页 |
| 3.3 流式细胞术检测细胞内ROS的水平 | 第40-41页 |
| 3.4 免疫印迹实验(Western Blotting) | 第41-44页 |
| 3.5 实时荧光定置PCR (qRT-PCR) | 第44-46页 |
| 3.6 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒 | 第46页 |
| 3.7 过氣化氢酶检测试剂盒 | 第46-47页 |
| 3.8 统计学分析 | 第47-48页 |
| 第四章 结果 | 第48-61页 |
| 4.1 H_2O_2和HNE对H1/HCE/HUVECs/GES-1细胞活性的影响 | 第48-49页 |
| 4.1.1 不同浓度H_2O_2和HNE对H1/HCE/HUVECs/GES-1细胞活性的影响 | 第48页 |
| 4.1.2 H_2O_2对H1/HCE细胞不同时间活性影响 | 第48-49页 |
| 4.2 H1/HCE细胞的不同应激反应 | 第49-51页 |
| 4.2.1 H_2O_2诱导H1细胞中ROS生成减少、HCE细胞中ROS生成增加 | 第49-50页 |
| 4.2.2 H_2O_2和HNE诱导H1细胞中3-NT生成减少、HCE细胞中3-NT生成增加 | 第50-51页 |
| 4.3 H1/HCE对细胞ROS生成酶NOX4的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.1 H_2O_2和HNE诱导H1细胞中NOX4生成减少、HCE细胞中NOX4生成增加 | 第51-52页 |
| 4.3.2 TPA对由于H_2O_2诱导引起的H1细胞中NOX4生成的减少的验证 | 第52页 |
| 4.4 H1/HCE细胞对抗氧化酶的影响 | 第52-56页 |
| 4.4.1 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶SOD的表达增强 | 第52-53页 |
| 4.4.2 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶Catalase的表达增强 | 第53-54页 |
| 4.4.3 H_2O_2和HNE诱导H1细胞抗氧化酶GSTP的表达增强 | 第54-55页 |
| 4.4.4 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶Prdx1的表达增强 | 第55-56页 |
| 4.5 H_2O_2和HNE诱导H1/HCE细胞自噬作用的研究 | 第56-61页 |
| 4.5.1 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白Beclin1的表达 | 第57页 |
| 4.5.2 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白Atg5- Atg12的表达 | 第57-58页 |
| 4.5.3 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白LC3B的表达 | 第58-59页 |
| 4.5.4 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白P62的表达 | 第59-61页 |
| 第五章 讨论 | 第61-64页 |
| 第六章 总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
