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人胚胎干细胞抗氧化特性的探究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 前言第16-30页
    1.1 人胚胎干细胞第16页
        1.1.1 人胚胎干细胞的由来第16页
        1.1.2 人胚胎干细胞的研究现状及意义第16页
    1.2 4-羟基壬烯醛(4-HNE)的简述第16-19页
        1.2.1 HNE的产生第16-17页
        1.2.2 HNE的毒性作用第17-18页
        1.2.3 HNE的代谢第18页
        1.2.4 HNE与疾病第18-19页
    1.3 氧化应激第19-25页
        1.3.1 氧化应激的简述第19-20页
        1.3.2 氧化应激模型的建立第20页
        1.3.3 ROS主要生成酶——NADPH氧化酶第20-22页
        1.3.4 氧化应激的评价第22-23页
        1.3.5 氧化应激在胚胎干细胞中的研究进展第23-25页
    1.4 氧化应激与自噬第25-30页
        1.4.1 自噬的简介第25-26页
        1.4.2 氧化应激与自噬的关系第26-29页
        1.4.3 胚胎干细胞中自噬的研究现状第29-30页
第二章 实验材料第30-37页
    2.1 实验材料与仪器第30-37页
        2.1.1 细胞第30页
        2.1.2 实验试剂第30-32页
        2.1.3 实验仪器第32-33页
        2.1.4 主要溶液配第33-37页
第三章 实验方法第37-48页
    3.1 细胞培养第37-39页
        3.1.1 细胞的复苏第37页
        3.1.2 细胞的传代第37-38页
        3.1.3 细胞的冻存第38-39页
        3.1.4 细胞计数及种板第39页
        3.1.5 H1/HCE/HUVEC/GES-1细胞的H2O2和HNE处理第39页
        3.1.6 H1/HCE细胞TPA处理第39页
    3.2 CCK-8法测定细胞的活性第39-40页
    3.3 流式细胞术检测细胞内ROS的水平第40-41页
    3.4 免疫印迹实验(Western Blotting)第41-44页
    3.5 实时荧光定置PCR (qRT-PCR)第44-46页
    3.6 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒第46页
    3.7 过氣化氢酶检测试剂盒第46-47页
    3.8 统计学分析第47-48页
第四章 结果第48-61页
    4.1 H_2O_2和HNE对H1/HCE/HUVECs/GES-1细胞活性的影响第48-49页
        4.1.1 不同浓度H_2O_2和HNE对H1/HCE/HUVECs/GES-1细胞活性的影响第48页
        4.1.2 H_2O_2对H1/HCE细胞不同时间活性影响第48-49页
    4.2 H1/HCE细胞的不同应激反应第49-51页
        4.2.1 H_2O_2诱导H1细胞中ROS生成减少、HCE细胞中ROS生成增加第49-50页
        4.2.2 H_2O_2和HNE诱导H1细胞中3-NT生成减少、HCE细胞中3-NT生成增加第50-51页
    4.3 H1/HCE对细胞ROS生成酶NOX4的影响第51-52页
        4.3.1 H_2O_2和HNE诱导H1细胞中NOX4生成减少、HCE细胞中NOX4生成增加第51-52页
        4.3.2 TPA对由于H_2O_2诱导引起的H1细胞中NOX4生成的减少的验证第52页
    4.4 H1/HCE细胞对抗氧化酶的影响第52-56页
        4.4.1 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶SOD的表达增强第52-53页
        4.4.2 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶Catalase的表达增强第53-54页
        4.4.3 H_2O_2和HNE诱导H1细胞抗氧化酶GSTP的表达增强第54-55页
        4.4.4 H_2O_2诱导H1细胞抗氧化酶Prdx1的表达增强第55-56页
    4.5 H_2O_2和HNE诱导H1/HCE细胞自噬作用的研究第56-61页
        4.5.1 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白Beclin1的表达第57页
        4.5.2 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白Atg5- Atg12的表达第57-58页
        4.5.3 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白LC3B的表达第58-59页
        4.5.4 H_2O_2和HNE处理H1/HCE细胞4小时,诱导细胞自噬相关蛋白P62的表达第59-61页
第五章 讨论第61-64页
第六章 总结第64-65页
参考文献第65-74页
附录第74-78页
致谢第78-79页

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