| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 种子储藏蛋白概述 | 第10页 |
| 1.2 膜泡运输 | 第10-12页 |
| 1.3 SNARE蛋白 | 第12-13页 |
| 1.3.1 SNARE蛋白分类及核心复合体结构 | 第12-13页 |
| 1.3.2 SNARE蛋白介导的膜融合机制 | 第13页 |
| 1.3.3 SNARE作用的调节因子 | 第13页 |
| 1.4 植物SNARE蛋白研究 | 第13-16页 |
| 1.4.1 植物中的SNARE蛋白 | 第14页 |
| 1.4.2 拟南芥中的SNARE蛋白分布 | 第14页 |
| 1.4.3 植物SNARE蛋白的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.4.4 植物特有的Qc-SNARE——Syp7家族 | 第16页 |
| 1.5 SNARE蛋白研究的前景及意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-40页 |
| 2.1 拟南芥培养 | 第17页 |
| 2.2 质粒构建 | 第17-25页 |
| 2.2.1 酶切、连接法构建质粒 | 第17-24页 |
| 2.2.2 Gateway系统构建质粒 | 第24-25页 |
| 2.3 转基因植株制作 | 第25-27页 |
| 2.3.1 农杆菌感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 2.3.2 农杆菌转化 | 第26页 |
| 2.3.3 农杆菌侵染 | 第26-27页 |
| 2.4 Western Blot | 第27-33页 |
| 2.4.1 Western样品制备 | 第27-28页 |
| 2.4.2 试剂配制 | 第28-30页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE | 第30-31页 |
| 2.4.4 转膜 | 第31-32页 |
| 2.4.5 封闭 | 第32页 |
| 2.4.6 孵育一抗 | 第32页 |
| 2.4.7 孵育二抗 | 第32页 |
| 2.4.8 显影 | 第32-33页 |
| 2.5 酵母双杂交 | 第33-36页 |
| 2.5.1 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.5.2 酵母双杂交用质粒载体的构建 | 第35页 |
| 2.5.3 酵母菌株AH109的复苏 | 第35页 |
| 2.5.4 酵母感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.5.5 待测质粒的转化 | 第35-36页 |
| 2.5.6 相互作用结果的分析 | 第36页 |
| 2.6 Pull Down | 第36-37页 |
| 2.6.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.6.2 实验准备以及试剂配制 | 第36-37页 |
| 2.6.3 Pull Down实验流程 | 第37页 |
| 2.7 瞬时表达 | 第37-40页 |
| 2.7.1 试剂准备 | 第38-39页 |
| 2.7.2 实验步骤 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-52页 |
| 3.1 突变体筛选 | 第40-42页 |
| 3.1.1 atsyp 71/72/ 73 T-DNA插入单突变体筛选 | 第40-41页 |
| 3.1.2 AtSYP71/72/73 共同RNAi植株的制作与筛选 | 第41-42页 |
| 3.2 AtSYP71/72/73过表达植物的制作与检测 | 第42-44页 |
| 3.2.1 AtSYP7 1/72/73过表达植物的制作 | 第42页 |
| 3.2.2 AtSYP71/72/73过表达植物的检测 | 第42-44页 |
| 3.3 AtSYP72/73可视化转基因植物的制作与检测 | 第44-45页 |
| 3.3.1 AtSYP72/73可视化转基因植物的制作 | 第44-45页 |
| 3.3.2 AtSYP72/73 可视化转基因植物的检测 | 第45页 |
| 3.4 突变体、过表达植物的表型观察 | 第45-47页 |
| 3.4.1 突变体种子储藏蛋白质的western检测 | 第45-46页 |
| 3.4.2 突变体和过表达植物的表型分析 | 第46-47页 |
| 3.5 AtSYP71/72/73与其他蛋白的相互作用 | 第47-50页 |
| 3.5.1 AtSYP71/72/73与AtUfe1的相互作用 | 第47-50页 |
| 3.5.2 AtSYP71/72/73与AtSec20的相互作用 | 第50页 |
| 3.6 AtSYP72与AtSYP73的亚细胞定位 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
