| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第11页 |
| 1.2 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.2.1 α-半乳糖苷酶的定义和功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 α-半乳糖苷酶的来源 | 第12-15页 |
| 1.2.3 α-半乳糖苷酶的分类 | 第15页 |
| 1.2.4 α-半乳糖苷酶的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.5 α-半乳糖苷酶的应用 | 第16-18页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.4 实验技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第20页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 黑曲霉基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌介导的黑曲霉的遗传转化 | 第25-27页 |
| 2.2.4 同源重组菌株中潮霉素抗性基因的消除 | 第27页 |
| 2.2.5 α-半乳糖苷酶酶活的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.6 重组菌株分泌蛋白检测 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-45页 |
| 3.1 α-半乳糖苷酶在黑曲霉中的同源表达 | 第29-39页 |
| 3.1.1 黑曲霉基因组的提取 | 第29页 |
| 3.1.2 α-半乳糖苷酶αglA和AglB基因的克隆 | 第29-37页 |
| 3.1.3 α-半乳糖苷酶基因黑曲酶表达载体pSZHG-αglA和pSZHG-AglB的构建 | 第37-39页 |
| 3.2 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第39-42页 |
| 3.2.1 采用冻融法转化农杆菌 | 第39-40页 |
| 3.2.2 农杆菌转化子与黑曲霉的共培养 | 第40-41页 |
| 3.2.3 黑曲霉转化子的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 黑曲霉同源重组转化子的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4 α-半乳糖苷酶在重组菌株中的表达 | 第43-45页 |
| 3.4.1 α-半乳糖苷酶酶活性测定 | 第43-44页 |
| 3.4.2 α-半乳糖苷酶在重组菌株中表达分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-48页 |
| 5.1 α-半乳糖苷酶基因的克隆 | 第46页 |
| 5.2 α-半乳糖苷酶αglA基因黑曲霉表达载体pSZHG-αglA和pSZHG-AglB的构建 | 第46页 |
| 5.3 黑曲霉重组转化子的筛选 | 第46页 |
| 5.4 同源重组转化子的筛选 | 第46页 |
| 5.5 RT-PCR鉴定结果 | 第46-47页 |
| 5.6 α-半乳糖苷酶重组菌株蛋白分泌检测 | 第47页 |
| 5.7 重组菌株酶活性检测 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |
