| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 弓形虫病概述 | 第12页 |
| 2 弓形虫致密颗粒蛋白功能特性及免疫原性的研究新进展 | 第12-18页 |
| 2.1 GRA类致密颗粒蛋白的功能特性及免疫原性研究新进展 | 第12-16页 |
| 2.2 三磷酸核苷酸水解酶(NTPasel和Ⅱ)类致密颗粒蛋白 | 第16-17页 |
| 2.3 蛋白酶抑制剂(TgPI 1,2;protease inhibitors)类致密颗粒蛋白 | 第17页 |
| 2.4 TgNF3的相关综述 | 第17-18页 |
| 2.5 结语 | 第18页 |
| 3 本试验的研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 弓形虫致密颗粒蛋白16基因的克隆及序列分析 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 1.1 虫株 | 第19-20页 |
| 1.2 主要的仪器与试剂 | 第20-21页 |
| 1.2.1 主要的仪器 | 第20-21页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.3 引物设计 | 第21页 |
| 1.4 样品的处理及DNA的提取 | 第21页 |
| 1.5 GRA16基因的克隆 | 第21页 |
| 1.6 GRA16基因序列的测定及其进化分析 | 第21-22页 |
| 1.7 GRA16蛋白二级结构及其抗原表位分析 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-25页 |
| 2.1 PCR扩增结果 | 第22-23页 |
| 2.2 TgGRA16基因的序列分析 | 第23-24页 |
| 2.3 GRA16基因序列的系统发育树 | 第24-25页 |
| 3 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 弓形虫细胞核因子3基因的克隆及序列分析 | 第26-33页 |
| 1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 1.1 虫株 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 引物设计与合成 | 第27页 |
| 1.4 虫体的纯化及RNA提取 | 第27页 |
| 1.5 TgNF3基因的RT-PCR扩增 | 第27页 |
| 1.6 PCR产物克隆 | 第27-28页 |
| 1.7 TgNF3的生物信息学分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.1 TgNF3基因的扩增和克隆 | 第28-29页 |
| 2.2 TgNF3蛋白的基本理化性质分析 | 第29页 |
| 2.3 TgNF3系统发育树构建 | 第29页 |
| 2.4 亲/疏水性分析和亚细胞定位 | 第29-30页 |
| 2.5 TgNF3的二级和三级结构预测 | 第30-31页 |
| 2.6 蛋白的抗原表位预测 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 弓形虫致密颗粒蛋白16与细胞核因子3核酸疫苗的评估 | 第33-64页 |
| 1 材料与方法 | 第33-53页 |
| 1.1 实验主要仪器与试剂 | 第33-40页 |
| 1.1.1 实验主要仪器 | 第33-35页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
| 1.1.3 溶液配制 | 第36-40页 |
| 1.2 实验动物 | 第40页 |
| 1.3 虫株 | 第40页 |
| 1.4 样品的处理 | 第40页 |
| 1.5 虫体基因组DNA提取 | 第40页 |
| 1.6 虫体基因组RNA提取 | 第40-41页 |
| 1.7 引物设计及基因扩增 | 第41页 |
| 1.8 GRA16基因的PCR扩增 | 第41页 |
| 1.9 TgNF3基因的RT-PCR扩增 | 第41-42页 |
| 1.10 琼脂糖电泳分析 | 第42页 |
| 1.11 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第42-43页 |
| 1.12 GRA16、NF3PCR产物的连接 | 第43页 |
| 1.13 重组质粒的转化 | 第43-44页 |
| 1.14 载体及目的片段的回收与连接 | 第44-45页 |
| 1.15 连接产物的转化 | 第45页 |
| 1.16 重组质粒的鉴定和质粒小量提取 | 第45页 |
| 1.17 小量提取无内毒素重组质粒 | 第45-46页 |
| 1.18 转染HEK 293细胞 | 第46页 |
| 1.19 间接免疫荧光试验 | 第46-47页 |
| 1.20 大量制备质粒与质粒纯化 | 第47-48页 |
| 1.21 重组弓形虫GRA16与NF3核酸疫苗免疫效果的评估 | 第48-53页 |
| 1.21.1 体液免疫与细胞免疫指标的的检测 | 第48页 |
| 1.21.2 小鼠血清的制备 | 第48-49页 |
| 1.21.3 IgG抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类的检测 | 第49页 |
| 1.21.4 免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第49-50页 |
| 1.21.5 可溶性抗原STAg溶液的制备 | 第50-51页 |
| 1.21.6 脾淋细胞增值(MTS) | 第51页 |
| 1.21.7 细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、和IL-10的检测 | 第51-52页 |
| 1.21.8 脾脏CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞的检测 | 第52页 |
| 1.21.9 免疫保护力试验 | 第52-53页 |
| 2 实验结果 | 第53-61页 |
| 2.1 弓形虫GRA16和NF3基因的扩增、克隆 | 第53-54页 |
| 2.2 弓形虫NF3基因的扩增、克隆 | 第54页 |
| 2.3 GRA16和NF3基因真核表达载体的构建及双酶切的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4 弓形GRA16和NF3基因的体外表达 | 第55-56页 |
| 2.5 弓形虫GRA16和NF3核酸疫苗免疫效果的研究 | 第56-58页 |
| 2.5.1 实验鼠血清中IgG抗体和IgG1、IgG2a抗体亚类的分布情况 | 第56-57页 |
| 2.5.2 实验鼠血清中IgG1、IgG2a抗体亚类水平的变化 | 第57-58页 |
| 2.6 细胞因子IFN-γ、IL2、IL4、ILI0和IL12p70的检测 | 第58-59页 |
| 2.6.1 细胞因子IFN-γ的检测 | 第58页 |
| 2.6.2 细胞因子IL2、IL4和IL10的检测 | 第58-59页 |
| 2.7 免疫小鼠T细胞亚类的检测 | 第59-60页 |
| 2.8 免疫小鼠抗弓形虫攻击感染试验 | 第60-61页 |
| 2.8.1 弓形虫RH株急性感染试验 | 第60页 |
| 2.8.2 实验鼠感染PRU株的脑包囊计数结果 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 本论文结论与创新点 | 第64-66页 |
| 一、本文结论 | 第64-65页 |
| 二、本文创新点 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附表1 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第75页 |
