| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-15页 |
| 第一部分 肉毒素轻链TAT-EGFPLC和重链HCS的构建和表达 | 第15-42页 |
| 1 前言 | 第15-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料及器材 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-31页 |
| 2.2.1 SNAP-25的质粒构建、表达、检测和活性测定 | 第19-24页 |
| 2.2.2 TAT-EGFP-HCS的质粒构建,表达和活性鉴定 | 第24-28页 |
| 2.2.3 LC和TAT-EGFP-LC的质粒构建,表达和生物活性鉴定 | 第28-31页 |
| 3 结果 | 第31-38页 |
| 3.1 SNAP-25的质粒构建、表达、检测和活性测定 | 第31-33页 |
| 3.1.1 SNAP-25的体外扩增和酶切鉴定 | 第31页 |
| 3.1.2 构建的SNAP-25质粒的测序 | 第31-32页 |
| 3.1.3 SNAP-25的蛋白纯化和生物活性检测 | 第32-33页 |
| 3.2 肉毒素重链HCS进行体外扩增,纯化及生物活性鉴定 | 第33-35页 |
| 3.3 肉毒素轻链LC质粒构建 | 第35页 |
| 3.4 肉毒素轻链LC纯化及生物活性鉴定 | 第35-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 第二部分 肉毒素轻链TAT-EGFPLC和重链HCS的生物功能研究 | 第42-57页 |
| 1 前言 | 第42-45页 |
| 1.1 肉毒素的各部分功能 | 第42页 |
| 1.2 SNAP-25的组成部分及功能 | 第42-43页 |
| 1.3 PTD的类型及穿膜机制 | 第43-44页 |
| 1.4 TAT的研究进展及应用 | 第44-45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-47页 |
| 2.1 材料 | 第45页 |
| 2.1.1 试剂与仪器 | 第45页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 2.2.1 荧光显微镜观察TAT-EGFP-HCS和TAT-EGFP-LC的细胞导入率 | 第45页 |
| 2.2.2 流式细胞仪分析TAT-EGFP-HCS的质粒构建细胞导入率 | 第45页 |
| 2.2.3 流式细胞仪检测蛋白导入细胞后细胞凋亡率 | 第45-46页 |
| 2.2.4 TAT-EGFP-HCS蛋白在C57BL/6小鼠的组织分布检测 | 第46页 |
| 2.2.5 数据统计 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-53页 |
| 3.1 蛋白EGFP、TAT-EGFP-HCS、TAT-EGGP-LC、TAT-EGFP对PC12细胞的穿膜能力 | 第47-48页 |
| 3.2 蛋白EGFP、TAT-EGFP-HCS、TAT-EGGP-LC、TAT-EGFP对BV2细胞的穿膜能力 | 第48页 |
| 3.3 蛋白EGFP、TAT-EGFP-HCS、TAT-EGGP-LC、TAT-EGFP对C6细胞的穿膜能力 | 第48-49页 |
| 3.4 蛋白EGFP、TAT-EGFP-HCS、TAT-EGGP-LC、TAT-EGFP对HeLa细胞的穿膜能力 | 第49-50页 |
| 3.5 蛋白EGFP、TAT-EGFP-HCS、TAT-EGGP-LC、TAT-EGFP对PC12细胞的凋亡的影响 | 第50-51页 |
| 3.6 TAT-EGFP-HCS蛋白在C57BL/6小鼠的心脑肝肾的分布 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 本论文创新性的自我评价 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 综述 | 第67-84页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 个人简介 | 第86页 |
